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    首頁 >> 茶常識

    茶樹黃酮醇合成酶基因的克隆與原核表達

    茶百科 2023-11-24 07:30:22

    茶樹黃酮醇合成酶基因的克隆與原核表達

    本研究采用EST測序技術(shù)和RT—PCR技術(shù)
    ,獲得了一個樹茶多酚代謝中的重要基因——黃酮醇合成酶(FLS)基因,在GenBank登錄(GenBank accession No.EF205150),其序列全長1317bp
    ,其中開放閱讀框長996bp
    ,編碼331個氨基酸
    ,3]端有一個明顯的多聚腺苷酸加尾信號
    ,推測的蛋白分子量約為37.5kD
    ,理論等電點為5.80。序列分析表明它與葡萄FLS基因序列的親緣關(guān)系比較近
    。將該基因重組到表達載體pET-32a(+)中進行原核表達
    ,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)、SDS-PAGE檢測
    ,結(jié)果表明茶樹黃酮醇合成酶基因能在大腸桿菌BL21中表達
    ,電泳檢測到一條大約61kD的外源蛋白,與預(yù)測的融合蛋白分子量相符
    。用Ni-NTA親和層析柱對融合蛋白進行純化
    ,得到了純度在90%以上的純化蛋白,為進一步研究PET-FLS融合蛋白的活性及功能奠定了基礎(chǔ)

    完成機構(gòu):中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所茶樹資源與改良研究中心,國家茶樹改良中心,杭州310008

    引物 基因 構(gòu)建克隆載體與表達載體 重組子的篩選 誘導(dǎo)表達以及如何檢測和純化表達產(chǎn)物

    1

    、一般是通過設(shè)計軟件,例如oligo6
    ,primer5等
    ,你可以在網(wǎng)上搜一下引物設(shè)計軟件下載和使用說明,是比較容易的
    。我一般用DANMAN設(shè)計引物
    ,這個軟件操作簡單,占用資源也小

    至于設(shè)計引物的一般原則如下:
    * 序列選取應(yīng)在基因的保守區(qū)段
    * 避免引物自身或與引物之間形成4個或4個以上連續(xù)配對
    ,避免引物自身形成環(huán)狀發(fā)卡結(jié)構(gòu)
    * 典型的引物18到24個核苷長。引物需要足夠長
    ,保證序列獨特性
    ,并降低序列存在于非目的序列位點的可能性。但是長度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性
    。較長的序列可能會與錯誤配對序列雜交
    ,降低了特異性,而且比短序列雜交慢
    ,從而降低了產(chǎn)量

    * Tm值在55-65℃(因為60℃核酸外切酶活性最高),GC含量在40%-60%
    * 引物之間的TM相差避免超過2℃
    * 引物的3’端避免使用堿基A
    ,引物的3’端避免出現(xiàn)3個或3個以上連續(xù)相同的堿基
    * 為避免的擴增
    ,引物設(shè)計最好能跨兩個外顯子。
    * Taqman探針PCR要求片段長度在80bp-150bp
    * 引物末端(最后5個核苷酸)不能有超過2個的G和C

    2
    、設(shè)計引物的時候你也順帶設(shè)計了酶切,那么就可以通過PCR擴增你的目的基因
    ,然后通過雙酶切獲得大量目的基因

    后續(xù)試驗要根據(jù)你需要此基因做什么研究來看了
    ,不同研究選用不同的表達載體,不同實驗需求是不同的
    ,這個建議你跟你們實驗室的其他人商量或者詢問老師
    ,希望這些能幫到你!

    研究進展 | 帶你搭上單倍型基因組研究的快車

    縱觀各領(lǐng)域焦點文獻

    ,不難發(fā)現(xiàn)
    ,目前研究者們主要采用四種組裝策略:

    第一種策略 是依賴于親本序列進行高效組裝的Trio-binning[1](Illumina+PacBio)法。這種方法雖簡便易行
    ,但在親本為雜合子時易出現(xiàn)reads的錯誤劃分


    第二種策略 是不依賴親本序列,結(jié)合Hi-C數(shù)據(jù)
    ,產(chǎn)出染色體級別單倍型的DipAsm[2](HiFi+Hi-C)法
    ,但對高度雜合區(qū)域易出現(xiàn)錯誤劃分;

    第三種策略 是有效利用HiFi reads生成高質(zhì)量單倍體的Hifiasm[3]法
    ,與DipAsm相比
    ,Hifiasm不僅保持了不依賴親本從頭組裝的優(yōu)勢,還降低了對Hi-C數(shù)據(jù)的依賴性
    ,簡化了流程
    ,一鍵式實現(xiàn)組裝和定相,且可整合Hi-C數(shù)據(jù)幫助掛載
    ,正逐漸成為高質(zhì)量組裝的首選方法


    第四種策略 是多倍體組裝策略——PolyGembler[4]或nPhase[5]法。其中前者分型需要提供家系數(shù)據(jù)
    ,后者需要提供參考基因組序列。

    由此可見
    ,異源多倍體單倍型分型原則上需提供親本序列
    ,若不能提供,至少要提供其進化上的祖先種/近似祖先種序列(用于比對來拆分不同的亞基因組)
    ,并在后期幫助掛載
    。到此,單倍型組裝的主流策略已介紹完畢
    ,細心的你更青睞哪種策略呢


    雖然大家已經(jīng)對單倍型組裝策略有了一定了解,但我們?nèi)孕柙俪脽岽蜩F一把
    ,繼續(xù)從文章分析內(nèi)容出發(fā)
    ,深入了解下單倍型基因組的研究思路!

    、研究背景

    茶是一種極為重要的經(jīng)濟作物
    ,含有多種被認為對人體健康有益的多酚化合物
    。茶樹是無性繁殖農(nóng)藝作物,這種無性繁殖能有效地保持有價值的基因型
    ,避免其因分離或有性重組而丟失
    。同時無性繁殖也容易導(dǎo)致作物積累有害突變,造成植物突變負荷升高
    。個體中高水平的有害突變最終會降低相對適合度
    ,從而降低農(nóng)藝表現(xiàn)。目前關(guān)于茶的遺傳負荷響應(yīng)機制尚不清楚
    。本研究將通過組裝茶單倍型基因組
    ,對等位基因特異性表達進行分析,并結(jié)合全基因組重測序數(shù)據(jù)對群體遺傳進化進行分析
    ,以預(yù)測對茶樹馴化育種具重要價值的分子機制


    二、材料方法

    PacBio+Illumina+Hi-C組合測序策略
    。以1個鐵觀音(TGY)個體為樣本
    ,結(jié)合129個全基因組重測序數(shù)據(jù)和近期發(fā)表的61個非冗余全基因組重測序資料構(gòu)建了一個完整的數(shù)據(jù)集。

    、主要結(jié)果

    1.鐵觀音單倍型基因組組裝

    TGY的基因組大小約為3.15 Gb
    ,雜合度為2.31%。文章首先使用PacBio長序列對初始contigs進行組裝
    ,隨后使用Illumina短序列進行糾正
    ,獲得了大小為5.41 Gb的基因組,表明整個基因組具有高雜合度
    。接著
    ,文章對雜合序列使用Khaper程序進行處理,得到大小為3.06 Gb的嵌合式基因組
    ,此時contig N50為1.94 Mb
    ,BUSCO完整性評估結(jié)果為93.7%。最后
    ,文章利用TGY基因組的高雜合性
    ,使用ALLHiC和Canu進行單倍型拆分和定相,從而產(chǎn)生15對假染色體和5.98 Gb的錨定序列
    。共線性分析結(jié)果顯示:兩種單倍型的基因序列高度一致
    。同時對單倍型間序列差異進行分析,發(fā)現(xiàn)兩種單倍型之間序列的重疊率為98.3%


    2. 鐵觀音單倍型基因組與茶樹基因組變異研究

    文章首先對單倍型基因組進行選擇壓力分析
    ,發(fā)現(xiàn)86.9%的等位基因?qū)Π辽僖粋€非同義替換。這些差異表明
    ,TGY單倍型基因組對揭示等位基因結(jié)構(gòu)和功能差異具參考意義
    。隨后文章對不同組織中等位基因表達情況進行分析
    ,發(fā)現(xiàn)大多數(shù)等位基因的表達模式是一致的,例如單倍型B的CsSRC2基因在第二個外顯子中具有兩個3-bp的插入和一個78-bp的缺失
    ,引入了兩個額外的氨基酸(賴氨酸和天冬酰胺)和蛋白質(zhì)序列中26個氨基酸的去除
    。而在單倍型A中也檢測到一個非同義突變,使氨基酸由谷氨酰胺變?yōu)榻M氨酸
    。對CsSRC2進行轉(zhuǎn)錄表達水平分析
    ,結(jié)果顯示,在不同組織中CsSRC2等位基因表達模式一致
    。另外
    ,文章還發(fā)現(xiàn)了386個在組織中表達有差異的等位基因,其中幾個基因與揮發(fā)性有機化合物的生物合成有關(guān)
    ,包括黃酮
    、黃酮醇和萜類化合物。隨后文章對等位基因差異表達(ASE)結(jié)果進行統(tǒng)計
    ,發(fā)現(xiàn)在14,691個基因中
    ,有4,423個基因(30.1%)在茶葉中表現(xiàn)出顯著的ASE。同時在6個組織中有1,528個基因偏向于一個等位基因的表達
    ,這些基因通常與核糖體
    、自噬作用、轉(zhuǎn)錄因子和剪接體等多種生物學(xué)過程相關(guān)
    ,提示減少有害突變的關(guān)鍵因子可能與基本生物功能中差異表達的基因相關(guān)聯(lián)


    文章又收集了129份茶樹材料和已發(fā)表的61份重測序茶樹樣品,進行了全基因組重測序
    ,分析確定了9,407,149個SNPs和829,388個小Indels (< 10 bp)
    。文章接著利用496,448個單拷貝基因的SNPs進行系統(tǒng)發(fā)育分析,結(jié)果顯示茶樹主要分成3個類群:C. taliensis
    、C. sinensis var. sinensis(CSS)和C. sinensis var. assamica(CSA)
    。使用SplitsTree和TreeMix進行分析,結(jié)果顯示茶樹系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系網(wǎng)絡(luò)復(fù)雜
    ,且茶樹群體之間存在顯著的基因交換。文章最后對CSA和CSS馴化基因進行分析
    ,發(fā)現(xiàn)兩個品種具有不同的芳香化合物
    、株高和耐寒性等特點,可能與馴化過程中人工選擇作用相關(guān)


    、研究結(jié)論

    該研究清楚地表明現(xiàn)代栽培品種種內(nèi)和種間基因漸滲對遺傳多樣性的貢獻,為茶樹的進化歷史提供了遺傳學(xué)和分子生物學(xué)方面的見解
    。同時
    ,該研究表明
    ,PacBio+Illumina+Hi-C測序技術(shù)可以助力準確單倍型基因組組裝,為分析變異與馴化機制提供基因組資源


    、研究背景

    荔枝是重要的熱帶水果,在20多個國家都有種植
    ,其突出的營養(yǎng)成分和誘人的顏色
    ,使其成為國際市場上具有吸引力的熱帶或亞熱帶水果之一。依據(jù)果實成熟期差異
    ,荔枝品種可分為極早熟品種(EEMC)
    、中早熟品種(EMC)和晚熟品種(LMC)。果實品質(zhì)較好的品種通常歸屬于LMC類群
    ,而EEMC類群的品種數(shù)量較少
    ,生產(chǎn)價值較低。然而造成荔枝品種差異的分子機制尚不清楚
    。研究荔枝基因組的結(jié)構(gòu)和進化對促進荔枝及無患子科近緣植株的遺傳改良具重要價值


    二、材料方法

    PacBio+Illumina +Hi-C+10x Genomics組合測序策略
    。以妃子笑為高質(zhì)量參考基因組
    ,結(jié)合72份野生或栽培種質(zhì)全基因組重測序資料構(gòu)建數(shù)據(jù)集。

    、主要結(jié)果

    1. 妃子笑單倍型基因組組裝

    妃子笑的初始組裝基因組大小為962Mb
    ,基因組雜合度2.27%。文章使用流式細胞儀或Survey方法評估基因組大小約為500或460Mb
    ,說明初始組裝版本包含兩套染色體信息
    。所以文章首先使用HaploMerger2進行單倍型分型,選擇與流式預(yù)估大小相近的基因組結(jié)合Hi-C數(shù)據(jù)進行掛載
    ,得到了15條假染色體(pseudochromosomes)
    ,大小為470Mb,BUSCO評估結(jié)果為96.2%
    。由于妃子笑基因組具高雜合度
    ,使得文章能夠接著利用 SNPs的reads分型組裝方法和10x Genomics測序數(shù)據(jù),成功組裝出妃子笑的兩個單倍型基因組
    ,然后利用不同群體材料全基因組重測序數(shù)據(jù)與15對染色體序列進行比對
    ,根據(jù)覆蓋度的差異獲得了云南單倍型(HY,450M)基因組和海南單倍型(HH
    ,455M)基因組
    ,指明了妃子笑基因組的來源。最后文章對獲得的單倍型進行了準確性的分析,發(fā)現(xiàn)HY和HH基因組序列之間總SNPs的平均雜合度為2.38%
    ,與k-mer估計值2.27%相似
    ,說明此次單倍型分型是準確的。

    2. 荔枝全基因組復(fù)制事件和變異分析

    生成單倍型基因組后
    ,文章首先對荔枝基因組進行了全基因組復(fù)制事件(WGD)分析
    ,發(fā)現(xiàn)荔枝僅發(fā)生過核心雙子葉植物共有的全基因組三倍化事件,說明以荔枝為代表的無患子科近期沒有發(fā)生WGD
    。隨后
    ,文章又收集了34份野生荔枝品種和38份栽培荔枝品種進行全基因組重測序分析,共鑒定出80,235,643個變異
    ,為荔枝的遺傳馴化研究提供參考


    3. 荔枝基因組等位基因差異表達分析

    由于荔枝基因組中相關(guān)等位基因差異表達可能對其生長和進化產(chǎn)生深遠影響。文章繼續(xù)對35個荔枝樣品中等位基因表達情況進行分析
    ,發(fā)現(xiàn)約14,000個差異等位基因(DEAs)處于穩(wěn)定差異表達狀態(tài)
    。隨后文章繼續(xù)對妃子笑荔枝樣品中等位基因表達情況進行分析,確定了13,517個DEAs
    。接著文章對DEAs分布區(qū)域進行匯總
    ,發(fā)現(xiàn)這些DEAs在某些基因組區(qū)域中高度富集,例如
    ,許多DEAs積聚在5號染色體的3′端
    。同時,文章發(fā)現(xiàn)與非差異表達的等位基因(EEAs)相比
    ,DEAs的啟動子
    、內(nèi)含子以及3'UTR和5'UTR具有更高的SNPs密度,這表明DEAs表達量的差異可能與轉(zhuǎn)錄因子和啟動子區(qū)的序列變異有關(guān)
    。最后文章對不同區(qū)域SNPs密度進行分析
    ,發(fā)現(xiàn)外顯子中的SNPs密度顯著低于其他區(qū)域(例如,外顯子與啟動子的差異為1.47倍)
    ,同時對于這些外顯子SNPs
    ,轉(zhuǎn)換比顛換更為普遍,且多數(shù)是非同義的
    。因此
    ,文章推測DEAs的兩個等位基因可能具不同功能,導(dǎo)致其對突變的耐受性較低


    為了剖析荔枝果實成熟的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)
    ,文章使用72個種質(zhì)進行了全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS),發(fā)現(xiàn)一個開花相關(guān)基因(LITCHI019307)在荔枝中具差異表達
    。接著文章對不同品種基因結(jié)構(gòu)進行分析,發(fā)現(xiàn)HY基因組中鑒定到的3.7 kb缺失片段可能有助于解釋荔枝種質(zhì)之間COL307差異表達和開花時間差異。

    、研究結(jié)論

    該研究通過PacBio+Illumina+Hi-C+10x Genomics測序技術(shù)
    ,結(jié)合全基因組重測序數(shù)據(jù),助力準確單倍型基因組組裝
    ,并對等位基因在不同組織中差異表達情況進行分析
    ,為利用變異助力馴化機制提供基因組與轉(zhuǎn)錄本資源。同時結(jié)合全基因組關(guān)聯(lián)分析
    ,為分子育種和基因組選擇提供了理想的靶標
    ,為培育多樣化荔枝品種提供參考。

    、研究背景

    生姜
    ,廣泛的藥用植物和香料之一,是許多國家傳統(tǒng)藥用系統(tǒng)中最著名的非處方藥之一
    。目前全球有超過39個國家在種植生姜
    ,中國和印度是兩個生姜生產(chǎn)大國。FAO的數(shù)據(jù)顯示
    ,2019年全球生姜產(chǎn)量為408萬噸
    ,是世界貿(mào)易中具重要經(jīng)濟價值的植物。同時生姜中具有多種生物活性化合物
    。其中
    ,姜辣素依據(jù)其藥理特性,被認為是生姜中最重要的藥用化合物
    。然而
    ,在姜屬中,迄今為止只有葉綠體基因組序列已公布
    ,可用來進行代謝相關(guān)研究的高質(zhì)量基因組組裝研究仍未開展
    ,這種基因組資源的缺乏嚴重阻礙了人們對生姜基因組進化和姜辣素生物合成途徑的理解。本研究將通過獲得生姜高質(zhì)量基因組與拆分單倍型基因組
    ,進一步揭示生姜生物學(xué)和育種相關(guān)內(nèi)容
    ,并為物種特異性姜辣素生物合成途徑提供依據(jù)。

    、材料方法

    PacBio+Illumina +Hi-C組合測序策略


    三、主要結(jié)果

    1. 生姜高質(zhì)量基因組和單倍型基因組組裝

    為了對生姜的基因組大小進行評估
    ,文章進行了k-mer分析
    ,結(jié)果表明生姜基因組大小約為1.59 Gb,雜合度為3.6%
    。文章使用Illumina
    、PacBio和Hi-C測序數(shù)據(jù),對生姜" Zhugen "(2n = 2x = 22)基因組進行組裝。首先文章使用Falcon軟件進行基因組contigs的從頭組裝
    ,并使用Falcon phase進行定相
    。然后文章用Arrow拋光contigs并用Pilon校正。得到單倍型1和單倍型0
    。最后文章使用Hi-C數(shù)據(jù)輔助掛載
    ,并獲得了兩套染色體水平的單倍型基因組,其中單倍型1的基因組大小為1.53 Gb
    ,包含669個contigs(N50為4.68 Mb)
    。而單倍型0的基因組大小為1.51 Gb,具有636個contigs(N50為5.28 Mb)


    2. 生姜單倍型基因組間的比較分析和等位基因差異表達分析

    文章使用PacBio長序列驗證單倍型1和單倍型0
    。發(fā)現(xiàn)PacBio長序列和單倍型1之間有97.95%的重疊,與單倍型0有98.1%的重疊
    ,而兩種單倍型之間的雜合率為3.78%
    ,與k-mer分析一致,表明單倍型間的分相是精確的
    。為了進一步了解單倍型間的差異
    ,文章繼續(xù)對兩種單倍型的選擇壓力進行分析,發(fā)現(xiàn)二者單拷貝基因的Ka / Ks比率是一致的
    ,這意味著兩種單倍型在生姜的馴化歷史中經(jīng)歷了相似的選擇壓力
    。此外,文章通過共線性分析在兩種單倍型之間共鑒定到了57個主要共線性塊
    ,且包含12個反轉(zhuǎn)
    ,表明單倍型間仍存在差異。隨后文章繼續(xù)對兩種單倍型間的同源基因進行分析
    ,共鑒定到了55,635個同源基因(占所有注釋基因的72.0%)
    。然后文章進一步對兩種單倍型的17,226個等位基因?qū)Φ奶卣鬟M行分析,發(fā)現(xiàn)大部分等位基因在染色體上的分布模式相似
    ,且這些等位基因的表達水平在單倍型之間沒有顯著差異
    。但是有2,055個基因?qū)Γ?1.9%)表現(xiàn)出等位基因之間的差異表達,且這些差異位點主要在代謝途徑中富集


    為了進一步揭示生姜生物代謝路徑中的關(guān)鍵因子
    ,文章對不同發(fā)育階段生姜根和莖中的差異表達基因(DEGs)進行分析,發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育階段生姜根莖中共6,690個基因呈現(xiàn)顯著下調(diào)表達趨勢
    ,773個基因上調(diào)
    。而轉(zhuǎn)錄組學(xué)和代謝物相關(guān)性分析表明,不同發(fā)育階段組織中部分基因家族的表達模式與姜辣素和姜黃素的積累程度相關(guān)


    、研究結(jié)論

    該研究通過PacBio+Illumina+Hi-C組合測序技術(shù)助力準確單倍型基因組組裝
    ,并對單倍型間差異進行了細致區(qū)分。隨后
    ,結(jié)合比較基因組
    ,對生姜基因組進化情況進行研究;并結(jié)合轉(zhuǎn)錄組學(xué)和代謝組學(xué)對在不同發(fā)育階段組織中等位基因差異表達情況和代謝物含量進行關(guān)聯(lián)分析
    ,分析了姜辣素生物合成基因家族成員之間的相關(guān)性,并提出了姜辣素類似物的骨架生物合成途徑
    ,為了解生姜代謝奠定了基礎(chǔ)


    上述內(nèi)容均顯示,單倍型基因組是結(jié)合變異與差異表達分析的重要突破口
    ,同時也是后續(xù)實現(xiàn)優(yōu)質(zhì)分析的先決條件
    。對分析內(nèi)容進行總結(jié)后,不難發(fā)現(xiàn)
    ,單倍型基因組與全基因組重測序相結(jié)合的研究方法可以為高水平文章的問世提供更多分析內(nèi)容與保障


    參考文獻

    1. Koren S, Rhie A, Walenz B P, et al. De novo assembly of haplotype-resolved genomes with trio binning[J]. Nature Biotechnology, 2018, 36:1174–1182.

    2. Garg S, FungtammasanA, Carroll A, et al. Chromosome-scale, haplotype-resolved assembly of human genomes[J]. Nature Biotechnology, 2021, 39:309–312.

    3. Cheng H, Concepcion G T, Feng X, et al. Haplotype-resolved de novo assembly using phased assembly graphs with hifiasm[J]. Nature Methods, 2021, 18:170–175.

    4. Zhou C, Olukolu B, Gemenet D C, et al. Assembly of whole-chromosome pseudomolecules for polyploid plant genomes using outbred mapping populations[J]. Nature Genetics, 2020, 52:1256–1264.

    5. Saada O A, Tsouris A, Eberlein C, et al. nPhase: an accurate and contiguous phasing method for polyploids[J]. Genome Biology, 2021, 22:126.

    6. Zhang X, Chen S, Shi L, et al. Haplotype-resolved genome assembly provides insights into evolutionary history of the tea plant Camellia sinensis[J]. Nature Genetics, 2021, 53:1250–1259.

    7. Hu G, Feng J, Xiang X, et al. Two divergent haplotypes from a highly heterozygous lychee genome suggest independent domestication events for early and late-maturing cultivars[J]. Nature Genetics, 2022, 54:73–83.

    8. Li HL, Wu L, Dong Z, et al. Haplotype-resolved genome of diploid ginger (Zingiber officinale) and its unique gingerol biosynthetic pathway[J]. Horticulture Research, 2021, 8:189.

    總黃酮醇苷又是什么

    黃酮苷(Flavone glycosides)是一種茶多酚物質(zhì)

    ,屬黃酮類。黃酮類化合物是一類存在于自然界的
    、具有2-苯基色原酮(flavone)結(jié)構(gòu)的化合物
    。它們分子中有一個酮式羰基,第一位上的氧原子具堿性,能與強酸成鹽
    ,其羥基衍生物多具黃色
    ,故又稱黃堿素或黃酮。

    黃酮類化合物在植物體中通常與糖結(jié)合成苷類

    ,小部分以游離態(tài)(苷元)的形式存在
    。絕大多數(shù)植物體內(nèi)都含有黃酮類化合物,它在植物的生長
    、發(fā)育
    、開花、結(jié)果以及抗菌防病等方起著重要的作用

    擴展資料:
    化學(xué)性質(zhì)

    1

    、水解反應(yīng)

    在制茶過程中,黃酮苷在熱和酶的作用下會發(fā)生水解

    ,脫去苷類配基變成黃酮或黃酮醇
    ,在一定程度上降低了苷類物質(zhì)的苦味。

    2

    、吸收光譜

    不同結(jié)構(gòu)的黃酮類化合物具有不同的吸收光譜

    。 但吸收峰大都在240-270nm和335-380nm之間

    3、顯色反應(yīng)

    黃酮及黃酮醇類可與濃硫酸

    、三氯化鋁反應(yīng)呈現(xiàn)出一定的顏色

    近年來,由于自由基生命科學(xué)的進展

    ,使具有很強的抗氧化和消除自由基作用的類黃酮受到空前的重視
    。類黃酮參與了磷酸與花生四烯酸的代謝、蛋白質(zhì)的磷酸化
    、鈣離子的轉(zhuǎn)移
    、自由基的清除、抗氧化活力的增強
    、氧化還原作用
    、螯合作用和基因的表達。

    參考資料來源:百度百科--黃酮苷

    基因工程原理與技術(shù)的圖書目錄

    第一章 概論1

    、基因工程的概念與基本步驟1
    、基因工程技術(shù)的發(fā)展歷程2
    三、基因工程的研究內(nèi)容5
    第二章 基因與基因表達調(diào)控7
    第一節(jié) 基因的結(jié)構(gòu)與功能7
    、基因的分子基礎(chǔ)7
    、結(jié)構(gòu)基因的基本結(jié)構(gòu)8
    三、原核生物基因結(jié)構(gòu)與調(diào)控模式8
    、真核生物基因結(jié)構(gòu)與調(diào)控模式9
    、特殊結(jié)構(gòu)與功能的基因11
    第二節(jié) 基因組的結(jié)構(gòu)與功能13
    一、病毒基因組的結(jié)構(gòu)與功能特點13
    、原核生物基因組的結(jié)構(gòu)與功能特點14
    、真核生物基因組的結(jié)構(gòu)與功能特點15
    四、線粒體基因組15
    、人類基因組16
    第三節(jié) 基因的表達與調(diào)控17
    、基因表達調(diào)控的(基本)原理18
    二、原核生物的基因表達調(diào)控20
    、真核生物的基因表達調(diào)控24
    本章小結(jié)29
    思考題30
    第三章 核酸的分離與分析31
    第一節(jié) 核酸的分離純化31
    、核酸分離提取的原則與要求31
    二、核酸提取的主要步驟31
    、質(zhì)粒DNA的分離純化33
    、基因組DNA的制備35
    五、RNA的提取35
    、核酸的定量36
    第二節(jié) 核酸的凝膠電泳37
    、瓊脂糖凝膠電泳37
    二、聚丙烯酰胺凝膠電泳38
    、凝膠電泳分離后核酸片段的回收及純化39
    第三節(jié) 聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)40
    、PCR技術(shù)的基本原理及特點40
    、PCR反應(yīng)體系與條件優(yōu)化42
    三、PCR技術(shù)拓展與應(yīng)用45
    第四節(jié) 核酸分子雜交技術(shù)47
    、核酸雜交的原理47
    、核酸探針的制備47
    三、核酸雜交種類與方法53
    本章小結(jié)59
    思考題59
    第四章 核酸分子的酶切
    、連接和修飾61
    第一節(jié) DNA分子的酶切61
    、限制性核酸內(nèi)切酶61
    二、限制性內(nèi)切酶切割DNA的方法64
    、影響限制性內(nèi)切酶活性的因素66
    、DNA酶切的應(yīng)用68
    第二節(jié) DNA分子的連接68
    一、連接酶69
    、黏性末端DNA片段的連接70
    三、平末端DNA片段的連接70
    、影響連接反應(yīng)的因素72
    第三節(jié) DNA分子的修飾73
    、DNA修飾酶73
    二、T4多聚核苷酸激酶對DNA的修飾作用74
    、堿性磷酸酶對DNA的修飾作用75
    本章小結(jié)75
    思考題76
    第五章 基因工程載體77
    第一節(jié) 質(zhì)粒載體77
    、質(zhì)粒的一般生物學(xué)特性77
    二、理想質(zhì)粒載體的必備條件78
    、常用的質(zhì)粒載體79
    第二節(jié) 噬菌體載體82
    、噬菌體載體的生物學(xué)特性82
    二、λ噬菌體載體83
    第三節(jié) 其他載體88
    、酵母載體89
    、人工染色體載體91
    第四節(jié) 表達載體94
    一、原核表達載體94
    、真核表達載體95
    本章小結(jié)100
    思考題101
    第六章 目的基因克隆102
    第一節(jié) PCR擴增法獲得目的基因102
    、RT?PCR法102
    二、其他PCR法104
    第二節(jié) 基因的合成109
    、DNA合成的原理109
    、人工合成基因110
    第三節(jié) 基因組DNA的克隆112
    一、基因組文庫的構(gòu)建和檢測112
    、大片斷文庫在環(huán)境基因組中的應(yīng)用115
    第四節(jié) cDNA文庫構(gòu)建及篩選116
    、RNA提取與質(zhì)量鑒定116
    二、cDNA文庫構(gòu)建119
    、cDNA文庫的質(zhì)量評價120
    第五節(jié) 差異克隆技術(shù)121
    、mRNA差異顯示技術(shù)(DDRT-PCR)121
    二、抑制性差減雜交123
    第六節(jié) DNA誘變124
    、定點突變125
    、隨機突變128
    第七節(jié) 轉(zhuǎn)化
    、篩選與鑒定129
    一、重組DNA導(dǎo)入受體細胞129
    、重組子的篩選與鑒定133
    、DNA序列測定136
    本章小結(jié)139
    思考題140
    第七章 原核細胞基因工程141
    第一節(jié) 原核表達體系141
    一、宿主菌141
    、原核表達載體143
    、密碼子偏好148
    四、質(zhì)?div id="jfovm50" class="index-wrap">?截悢?shù)149
    第二節(jié) 原核表達策略149
    、包含體型表達149
    二、分泌型表達150
    、融合型表達150
    、其他表達151
    第三節(jié) 基因工程菌的大規(guī)模培養(yǎng)152
    一、基因工程菌發(fā)酵的特點152
    、基因工程菌的深層培養(yǎng)方式153
    、相關(guān)發(fā)酵的反應(yīng)器155
    第四節(jié) 原核表達產(chǎn)物的分離純化156
    一、分離純化的目標與策略156
    、分離純化的一般過程158
    、包含體的溶解和重組蛋白的復(fù)性160
    四、分泌蛋白質(zhì)的濃縮161
    第五節(jié) 基因工程菌不穩(wěn)定性及對策162
    、基因工程菌不穩(wěn)定性產(chǎn)生的原因162
    、改善基因工程菌不穩(wěn)定性的方法163
    第六節(jié) 原核表達應(yīng)用舉例165
    本章小結(jié)166
    思考題166
    第八章 酵母基因工程168
    第一節(jié) 酵母基因工程表達體系168
    一、酵母基因表達宿主系統(tǒng)168
    、酵母表達載體171
    、轉(zhuǎn)化方法173
    第二節(jié) 常見酵母基因表達系統(tǒng)174
    一、釀酒酵母表達系統(tǒng)174
    、畢赤酵母表達系統(tǒng)176
    第三節(jié) 影響外源基因表達的因素179
    、轉(zhuǎn)錄水平控制179
    二、表達載體的拷貝數(shù)和穩(wěn)定性179
    、其他因素180
    、酵母表達系統(tǒng)的新的應(yīng)用方向180
    第四節(jié) 酵母基因工程應(yīng)用舉例181
    一、利用重組酵母生產(chǎn)乙肝疫苗181
    、利用重組酵母生產(chǎn)人血清白蛋白182
    本章小結(jié)183
    思考題183
    第九章 動物基因工程184
    第一節(jié) 動物細胞基因工程184
    、動物細胞表達體系184
    二、動物細胞表達載體的構(gòu)建與優(yōu)化188
    、動物細胞轉(zhuǎn)化方法與篩選191
    第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因動物194
    、轉(zhuǎn)基因動物概念194
    二、哺乳動物的轉(zhuǎn)基因操作194
    、外源基因的整合與表達199
    第三節(jié) 動物轉(zhuǎn)基因技術(shù)的應(yīng)用前景202
    、基因功能的研究202
    、在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用203
    三、在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用204
    本章小結(jié)205
    思考題206
    第十章 植物基因工程207
    第一節(jié) 植物基因工程中的轉(zhuǎn)基因受體207
    、高等植物的遺傳學(xué)特性207
    、愈傷組織受體系統(tǒng)208
    三、原生質(zhì)體209
    、種質(zhì)受體系統(tǒng)209
    、胚狀體受體系統(tǒng)210
    六、直接分化芽受體系統(tǒng)210
    第二節(jié) 植物基因工程載體210
    、植物基因工程載體的種類和特性210
    、植物基因工程載體的構(gòu)建211
    第三節(jié) 高等植物基因的表達系統(tǒng)215
    一、外源基因的四環(huán)素誘導(dǎo)系統(tǒng)215
    、外源基因的乙醇誘導(dǎo)系統(tǒng)216
    、外源基因的類固醇誘導(dǎo)系統(tǒng)217
    第四節(jié) 植物轉(zhuǎn)基因方法218
    一、根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法218
    、基因槍法220
    、花粉管通道法222
    四、其他轉(zhuǎn)基因方法223
    第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因植物篩選與鑒定225
    、生物學(xué)篩選225
    二、標記基因的表達檢測225
    、目的基因及其表達的分子鑒定227
    第六節(jié) 植物基因工程應(yīng)用舉例228
    、基因工程生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因黃金水稻228
    二、抗蟲害的轉(zhuǎn)基因植物228
    、抗除草劑植物的育種229
    本章小結(jié)229
    思考題230
    第十一章 基因工程相關(guān)新技術(shù)231
    第一節(jié) 生物信息學(xué)231
    、生物信息學(xué)概述231
    二、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫231
    、生物信息的檢索及策略232
    、序列比對分析232
    五、核酸序列分析234
    、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析236
    第二節(jié) 芯片技術(shù)238
    、基因芯片的原理238
    二、基因芯片的種類238
    、基因芯片制作技術(shù)的基本步驟240
    、基因芯片技術(shù)的應(yīng)用241
    第三節(jié) 蛋白質(zhì)組學(xué)與酵母雙雜交242
    一、蛋白質(zhì)組學(xué)242
    、酵母雙雜交245
    本章小結(jié)247
    思考題247
    第十二章 重組DNA技術(shù)的應(yīng)用248
    第一節(jié) DNA與疾病診斷248
    、基因診斷的含義248
    二、基因診斷的原理及特點249
    、基因診斷的方法249
    、基因診斷的應(yīng)用252
    、問題及展望254
    第二節(jié) 疾病的基因治療254
    一、基因治療的概念及內(nèi)容255
    、基因治療的分子機制255
    、載體系統(tǒng)256
    四、基因治療的策略與方法256
    、疾病的基因治療示例257
    、問題及展望259
    第三節(jié) 傳染病的防治259
    一、新發(fā)和再發(fā)傳染病的特征260
    、傳染病防治的新策略及研究內(nèi)容260
    、基因工程疫苗261
    四、基因工程抗體264
    、DNA重組技術(shù)在傳染病防治中應(yīng)用的前景與展望264
    第四節(jié) 蛋白質(zhì)工程265
    、蛋白質(zhì)工程的概念與研究內(nèi)容265
    二、蛋白質(zhì)工程分子設(shè)計的理性策略266
    、蛋白質(zhì)定向改造的方法266
    、蛋白質(zhì)工程的應(yīng)用266
    五、蛋白質(zhì)工程前景與展望268
    第五節(jié) 途徑工程268
    、途徑工程的基本概念268
    、途徑工程的基本原理269
    三、途徑工程的基本過程269
    、途徑工程的研究內(nèi)容270
    、途徑工程前景及展望272
    本章小結(jié)272
    思考題272
    第十三章 基因工程產(chǎn)品的管理、專利及安全性273
    第一節(jié) 實驗室管理要求273
    、實驗室生物安全管理的概念和依據(jù)273
    、實驗室生物安全管理的硬件要求274
    三、一般實驗室的基本生物安全規(guī)程275
    第二節(jié) 基因工程產(chǎn)品的釋放
    、管理與要求275
    、基因工程產(chǎn)品的釋放275
    二、基因工程產(chǎn)品的管理277
    、基因工程產(chǎn)品的管理要求與具體措施278
    第三節(jié) 專利管理280
    、基因工程產(chǎn)品的專利保護的必要性280
    二、基因工程產(chǎn)品專利保護的爭議281
    、對基因產(chǎn)品實現(xiàn)專利保護的條件——三性要求283
    本章小結(jié)284
    思考題284
    索引285
    參考文獻288

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