一
支原體培養(yǎng)結(jié)果上面會(huì)有具體的數(shù)值的。如果陽(yáng)性
陽(yáng)性
在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上
,抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散,其濃度呈梯度遞減,因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長(zhǎng)受到抑制。過(guò)夜培養(yǎng)后形成一個(gè)抑菌圈,抑菌圈越大二
實(shí)驗(yàn)材料
普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基:可去生化試劑店購(gòu)買
藥敏試紙:購(gòu)買或自制(詳見(jiàn)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備)
細(xì)菌:待做藥敏試驗(yàn)的細(xì)菌
儀器:接種環(huán)、酒精燈
實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
2.1 藥敏片的準(zhǔn)備:購(gòu)買或自制
2.1.1 制備方法:取新華1號(hào)定性濾紙
2.1.2 抗菌藥紙片制作:在上述含有50片紙片的青霉素瓶?jī)?nèi)加入藥液0.25毫升,并翻動(dòng)紙片
,使各紙片充分浸透藥液,翻動(dòng)紙片時(shí)不能將紙片搗爛。同時(shí)在瓶口上記錄藥物名稱,放37℃溫箱內(nèi)過(guò)夜,干燥后即密蓋,如有條件可真空干燥。切勿受潮,置陰暗干燥處存放,有效期3-6個(gè)月。2.2 藥液的制備(用于商品藥的試驗(yàn)):按商品藥的使用治療量的比例配制藥液
;如商品藥百病消按其說(shuō)明量治療量0.01%飲水,可按這個(gè)比例配制藥液,可取10毫克加入10毫升的水中混勻。此稀釋液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。實(shí)驗(yàn)操作方法
3.1 藥敏片法
3.1.1 在“超凈臺(tái)”中
,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物,以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開(kāi)始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液3.1.2 將鑷子于酒精燈火焰滅菌后略停
,取藥敏片貼到平皿培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼,可用鑷子輕按幾下藥敏片。為了使能準(zhǔn)確的觀察結(jié)果,要求藥敏片能有規(guī)律的分布于平皿培養(yǎng)基上;一般可在平皿中央貼一片,外周可等距離貼若干片(外周一般可貼七片),每種藥敏片的名稱要記住。3.1.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后
,觀察效果。3.2 牛津杯法
3.2.1 在“超凈臺(tái)”中,用經(jīng)(酒精燈)火焰滅菌的接種環(huán)挑取適量細(xì)菌培養(yǎng)物
,以劃線方式將細(xì)菌涂布到平皿培養(yǎng)基上。具體方式;用滅菌接種環(huán)取適量細(xì)菌分別在平皿邊緣相對(duì)四點(diǎn)涂菌,以每點(diǎn)開(kāi)始劃線涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二點(diǎn)劃線至平皿的1/2,依次劃線,直至細(xì)菌均勻密布于平皿。(另:可挑取待試細(xì)菌于少量生理鹽水中制成細(xì)菌混懸液,用滅菌棉拭子將待檢細(xì)菌混懸液涂布于平皿培養(yǎng)基表面。要求涂布均勻致密。)3.2.2 以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管(內(nèi)徑6nm、外徑8nm
、高10nm的圓形小管,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上,輕輕加壓,使其與培養(yǎng)基接觸無(wú)空隙3.2.3 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后,觀察效果
3.3 打孔法:
該法較簡(jiǎn)單
3.3.1 在“超凈臺(tái)”中
3.3.2 以無(wú)菌操作將滅菌的不銹鋼小管(外徑為4毫米
、孔徑與孔距均為3毫米,管的兩端要光滑,也可用玻璃管、瓷管),放置在培養(yǎng)基上打孔,將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出3.3.3 加樣:按不同藥液加樣,樣品加至滿而不溢為止
3.3.4 將平皿培養(yǎng)基置于37℃溫箱中培養(yǎng)24小時(shí)后
三
培養(yǎng)基
細(xì)菌藥敏試驗(yàn)所用的培養(yǎng)基種類較多
細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的培養(yǎng)基厚度大約為4mm,若培養(yǎng)基厚度大于4mm
試紙片
試紙片材質(zhì)的好壞
含藥紙片的片間差和質(zhì)量好壞是做藥敏試驗(yàn)的關(guān)鍵。一些藥敏紙片買來(lái)時(shí)就有抑菌環(huán)偏大或偏小的問(wèn)題
細(xì)菌
由于各種菌對(duì)藥物的敏感性不同
藥敏試驗(yàn)中要將菌液均勻地涂在培養(yǎng)基上
,使細(xì)菌均勻分布,這樣才能使試驗(yàn)結(jié)果不會(huì)出現(xiàn)較大的偏差。涂菌后15min才能貼藥敏紙片。由于涂菌后,細(xì)菌要有一段時(shí)間的適應(yīng)過(guò)程,但是時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng),否則會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥。貼藥敏紙片時(shí),每取一種藥敏紙片必須燒一下鑷子口,避免藥敏紙片之間相互混淆,以提高藥敏的準(zhǔn)確性四
紙片擴(kuò)散法
該法是將含有定量抗菌藥物的濾紙片貼在已接種了測(cè)試菌的瓊脂表面上
稀釋法
稀釋法藥敏試驗(yàn)可用于定量測(cè)試抗菌藥物對(duì)某一細(xì)菌的體外活性,分為瓊脂稀釋法和肉湯稀釋法
。實(shí)驗(yàn)時(shí),抗菌藥物的濃度通常經(jīng)過(guò)倍比(lg2)稀釋,能抑制待測(cè)菌肉眼可見(jiàn)生長(zhǎng)的最低藥物濃度成為最小抑菌濃度(MIC),一個(gè)特定抗菌藥物的測(cè)試濃度范圍應(yīng)該包含能夠檢測(cè)細(xì)菌的解釋性折點(diǎn)(敏感、中介和耐藥)的濃度,同時(shí)也應(yīng)該包含質(zhì)控參考菌株的MIC。本文地址:http://m.mcys1996.com/jiankang/301031.html.
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