• 

      <ul id="s6iya"><pre id="s6iya"></pre></ul>
    • <kbd id="s6iya"><pre id="s6iya"></pre></kbd>
    • 

    • 





      
    
      
       
      
        
    
  
    
        
    
    登錄
    
      

      




      
    
      
       首頁 >> 健康生活
    
      

      


      
    
      
        
      實驗新人必讀：細胞培養(yǎng)那些事兒
      
        
      
            中醫(yī)世家
            2024-05-30 04:18:40
        
      

        
      
           
      2016年10月08日訊 細胞培養(yǎng)的路上
      ，有多虐心就有多少需要值得注意的地方。小小的平皿之中，細胞點點
      ，引無數(shù)英雄競掛東南枝
        。正所謂“萬事開頭難”
      ，即便是細胞復蘇與保存這兩件看似簡單的事情
      ，也能造成實驗汪內(nèi)心無比巨大的陰影面積
      。好在小魚這里有本細胞培養(yǎng)秘籍
      ，可讓細胞這個熊孩子徹底變?yōu)槟愕馁N心小棉襖
      。
      其實，剛剛復蘇的細胞就像是剛剛出生的baby
      ，非常脆弱
      ，需要各位小伙伴的細心呵護，不然
      ，細胞就會被我們花樣玩死
      。為了避免細胞不明不白的掛掉，我們就要對細胞的各種習性了如指掌
      。
      1. 俗語道
      ，到什么山上唱什么歌
      ，不同細胞用不同的培養(yǎng)液。此時
      ，就不得不提起培養(yǎng)基里的“四大金剛”-MEM
      、DMEM、1640
      、F-12
      ，它們基本參與了90%以上種類細胞的培養(yǎng)過程。
      MEM作為帶頭大哥
      ，能力非常全面
      ，號稱是應用最廣泛的細胞培養(yǎng)液。
      DMEM作為隨時緊跟老大MEM的二弟
      ，青出于藍而勝于藍
      ，濃度要高出2--4倍，可分為高糖型（含葡萄糖4500mg/L）和低糖型（含葡萄糖1000mg/L）
      。
      老三1640中規(guī)中矩
      ，營養(yǎng)成分比較簡單，比DMEM少一點糖和谷光甘肽
      ，常用于淋巴細胞的培養(yǎng)
      。
      小兄弟F12常用來支持CHO、Hela和L--細胞生長以及原代大鼠肝細胞和前列腺上皮細胞的培養(yǎng)
      。MEM和F12 這兩種培養(yǎng)基各取1/2
      ，即可形成神經(jīng)生物學最通用的培養(yǎng)基。
      2. 細胞生長的空間密度是細胞培養(yǎng)的關鍵
      。具體養(yǎng)細胞時應該摸索細胞喜歡的生長空間密度
      ，既不能讓細胞瓶里的細胞因擁擠不堪而萎靡不振；也不能讓細胞濃度低于1--5×10^5個/mL而導致“孤獨死”（因為細胞的健康生長需要細胞間的連接）
      。因而細胞接種前
      ，要先通過細胞計數(shù)來調整細胞濃度。
      3. 當培養(yǎng)的貼壁細胞形態(tài)不好時
      ，可在傳代時
      ，先倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清都可以）洗滌一次
      ，用滴管吸走
      ，再加入3ml培養(yǎng)基，沿著瓶底輕輕吹打一遍
      ，然后吸走
      。這時在正式進行消化、吹打
      。
      其次
      ，把吹打下的細胞懸液加入到含有新培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶內(nèi)
      ，置于培養(yǎng)箱里培養(yǎng)，按時間點觀察細胞貼壁情況（10min
      ，20min
      ，30min）。而后迅速倒出其中的培養(yǎng)基
      ，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次
      ，然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)并觀察細胞生長情況以及形態(tài)。直至找到細胞完美的形態(tài)為止
      。
      4. 至于在培養(yǎng)瓶中加入多少培養(yǎng)基量
      ，則是需要實驗汪們自己去摸索的。對于生長快的細胞
      ，易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基
      ，細胞形態(tài)會更好，但是要注意對換液時間的把握
      。
      5. 如何選擇培養(yǎng)瓶
      。一般，生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài)
      ，那么采用塑料瓶會比玻璃瓶的效果好
      ；生長速度快的細胞，用玻璃瓶培養(yǎng)的效果會更好
      。因此，對于同一種細胞
      ，在其生長速度慢的時候（比如細胞剛復蘇時或者原代培養(yǎng)）
      ，塑料瓶會好一點；而在其生長旺盛的時候
      ，玻璃瓶則相對會好一點
      。
      6. 細胞凍存時，蓋子要擰緊
      ，不然復蘇水浴時會滲水
      ，造成細胞污染。因而凍存管要選擇原配的管子和蓋子（不同牌子
      、型號的管子會有差別）
      ，蓋子擰緊后最好用封口膜封住。且每支凍存管都要標上細胞的名稱
      、凍存時間
      ，并記錄在冊，以免后續(xù)復蘇細胞時
      ，取錯細胞
      。
      7. 細胞凍存時要嚴格進行梯度降溫（-4℃→-20℃---40℃→-80℃→液氮）
      。要知道冰火兩重天的生活環(huán)境只會讓嬌弱的細胞自爆身亡，謹記：緩降溫
      ！但如果真心趕時間時
      ，可以使用細胞凍存盒進行細胞凍存，而后盡快將其轉入液氮中
      。此外
      ，要定期測量液氮罐里的液氮儲備，以保證細胞全部浸在液面下
      。
      8. 細胞解凍時
      ，由于凍存管管壁較厚、隔熱
      ，而導致水浴時間太長（2min還沒融化）時
      ，可以將水浴鍋的溫度調至40℃左右，可以縮短解凍時間
      。
      9. 提前預定超凈臺
      ，減少復蘇后插在冰盒里等待的時間，可避免細胞房人滿為患
      ，超凈臺使用緊張
      ，復蘇1h后，還沒有加入新的培養(yǎng)液
      。（高濃度DMSO防止胞內(nèi)形成冰晶
      ，凍存時保護細胞，但復蘇融解后
      ，浸泡時間太久會對細胞有毒性）
      10. 復蘇細胞時一定要有耐心
      ，因為有些細胞在復蘇一星期后才會真正有起色。因而
      ，盡管細胞在復蘇三四天后沒有任何動靜
        ，也不要輕易倒掉所有細胞，要耐心等待
        ，兩周后再做決定
        。
      11. 有關DMSO的一些注意事項：
      （1） DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，降低冰點
        、延緩凍存過程
        ，同時提高細胞內(nèi)的離子濃度、減少細胞內(nèi)冰晶的形成
      ，從而減少細胞損傷程度
      。
      （2） DMSO在溶解過程中會放熱，應先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時凍存液最好提前配置
      ，DMSO現(xiàn)配對細胞的毒性可能更大
      ；
      （3） 復蘇時，要離心去除DMSO
      ，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌1-2次
      ，注意離心的時候速度不要太快。
      

          
      本文地址:http://m.mcys1996.com/jiankang/294665.html.
      
          
      
                聲明：  我們致力于保護作者版權
      ，注重分享
      ，被刊用文章因無法核實真實出處，未能及時與作者取得聯(lián)系
      ，或有版權異議的
      ，請聯(lián)系管理員，我們會立即處理
      ，本站部分文字與圖片資源來自于網(wǎng)絡
      ，轉載是出于傳遞更多信息之目的,若有來源標注錯誤或侵犯了您的合法權益，請立即通知我們(管理員郵箱：douchuanxin@foxmail.com)
      ，情況屬實
      ，我們會第一時間予以刪除，并同時向您表示歉意,謝謝!
             
      
  
      
          上一篇:
       ，那換頭之后呢
      ？" rel="prev">
                                            人類大腦對截去的四肢存有記憶，那換頭···
                                        
      
      
      
      
          下一篇:
       ？" rel="prev">
                                            為什么睡前想喝水
      

  
    
      相關文章
      
        
      
             
                
            
      
                
      
                    
                        
      手出好多小水泡，還特別癢
      ？一定要分清是汗皰疹還是手蘚
        ！
      
                        
      對于女性朋友來講手可謂是“第二張臉”，白皙
        、光滑、修長的雙手
        ，不僅看起來十分靈巧而且還能提升個人氣質
        。不過生活中也有很多人，不僅手部皮膚特別粗糙
                
                  ，還特別癢一定要分清是汗皰疹還是手蘚
        ！.png" alt="手出好多小水泡，還特別癢？一定要分清是汗皰疹還是手蘚
        ！" onerror="nofind(this)" >
                 
            
      
 
                
            
      
                
      
                    
                        
      單身貴族易群體性焦慮(單身貴族該怎么做)
      
                        
       　調查顯示80%的25至40歲的單身男人和女人“是快樂的”
        ，專家提醒“剩男剩女”不快樂的背后隱藏了煩躁、焦慮
        ，甚至抑郁等消極情緒
        ，而剛剛過去的情人節(jié)，成為單身們焦慮的高發(fā)期
 
                
            
      
                
      
                    
                        
      芹菜與黃瓜同食好嗎
      
                        
      芹菜與黃瓜同食好嗎芹菜不宜與黃瓜一同食用
        ，這是因為黃瓜中含有維生素C分解酶，這種物質會導致芹菜的營養(yǎng)價值降低
 
                
            
      
                
      
                    
                        
      老人健康飲食的10大要點
      
                        
      食要早早就是到了飯點得吃飯
 
                
            
 
                
            
 
                
            
      
                
      
                    
                        
      寶寶睡覺時驚厥的癥狀,如何預防小兒驚厥
      
                        
      一、寶寶睡覺時驚厥的癥狀有哪些癥狀一：嬰兒在剛入睡時或即將醒時滿頭大汗
        。專家提醒：可以說大多數(shù)嬰兒夜間出汗都是正常的
        。但如果大汗淋漓，并伴有其他不適的表現(xiàn)
        ，就要注意觀察