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中藥復(fù)方消癌根對腫瘤生長的影響

醫(yī)案日記 2023-06-16 09:17:27

材料與方法

(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠60只,4~6周齡

,體重18~22g
,雄性,購自南方醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心
。實(shí)驗(yàn)前分籠飼養(yǎng)適應(yīng)環(huán)境1周
,實(shí)驗(yàn)過程中動(dòng)物自由攝食、飲水
,鼠房保持通風(fēng)
,室溫保持在25±2℃,光照周期12/12小時(shí)

(二)細(xì)胞株

細(xì)胞株為小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株S180細(xì)胞

,皮下接種可生成肉瘤
。購于中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所,常規(guī)復(fù)蘇傳代培養(yǎng)

(三)主要藥物

、試劑和儀器

中藥復(fù)方消癌根,由董草原醫(yī)生提供

環(huán)磷酰胺

,江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司生產(chǎn),批號02071121

(四)消癌根藥液的制備

消癌根是由純中藥粉碎而得的黑褐色藥粉

。根據(jù)人與小鼠藥物劑量換算公式:d小鼠=d人×(k小鼠/k人),(k小鼠
、k人分別為小鼠和人的折算系數(shù))算出小鼠每日給藥劑量
。取體重為50kg正常成人每日口服消癌根劑量為9g,算得小鼠每日給藥低劑量
,再將其劑量增加一倍設(shè)為高劑量
;然后算出藥液所要濃度。用蒸餾水將消癌根分別配成每毫升含0.10g
、0.05g生藥的高
、低兩個(gè)劑量組的懸濁液,4℃冰箱保存
,用時(shí)搖勻

用無菌生理鹽水將環(huán)磷酰胺稀釋成為2mg/ml,4℃冰箱保存

(五)荷瘤小鼠模型的建立

體外復(fù)蘇培養(yǎng)S180細(xì)胞:將S180細(xì)胞培養(yǎng)于含體積分?jǐn)?shù)為10%小牛血精的RPMI-1640營養(yǎng)液(含青霉素100×103?滋/L和鏈霉素100mg/L)中

,置于37℃、含5%CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)
。該細(xì)胞呈貼壁生長
,取指數(shù)生長期的細(xì)胞,用0.5%胰蛋白酶消化
,機(jī)械吹打成細(xì)胞懸液
,PBS洗滌2次,2000r/min離心5min
,棄上清液,用無菌生理鹽水稀釋
,調(diào)整到2×106/ml~3×106/ml個(gè)瘤細(xì)胞
,隨機(jī)先取5只健康昆明種小鼠,每只用上述細(xì)胞懸液0.4ml腹腔注射
,注意觀察接種小鼠腹水生長情況
,約1周后接種小鼠腹部明顯增大
、凸出。將其頸椎脫臼處死
,固定于蠟板上
,無菌抽取乳白色腹水液,以0.9%氯化鈉溶液1:1稀釋
,經(jīng)0.2%臺盼藍(lán)染色后計(jì)算活細(xì)胞數(shù)﹥95%
,調(diào)整瘤細(xì)胞懸液濃度為6×106/ml個(gè)瘤細(xì)胞,每只小鼠右后肢臀部皮下接種0.2ml
。共接種44只小鼠
。24小時(shí)后用藥。

(六)實(shí)驗(yàn)分組和給藥

將44只造模成功的小鼠隨機(jī)分為4組

,每組11只
,組內(nèi)編號。4組分別為:消癌根高劑量組
、消癌根低劑量組
、陰性對照組及環(huán)磷酰胺組。所有處理自造模第二天開始:消癌根高
、低劑量組分別按24g·kg-1·d-1
、2g·kg-1·d-1灌胃,陰性對照組給相同劑量的蒸餾水灌胃
,環(huán)磷酰胺組按20mg·kg-1·d-1腹腔注射
。連續(xù)用藥15天后停藥,處死小鼠
,剝離瘤塊
,用濾紙吸干后,稱取瘤重

(七)評定指標(biāo)

(1)腫瘤抑制百分率(抑瘤率):

抑瘤率(%)=(陰性對照組平均瘤重-治療組平均瘤重)/(陰性對照組平均瘤重)×100%

(2)給藥期間

,每隔3天用游標(biāo)卡尺由體外測出瘤體的長徑和短徑,然后根據(jù)體積=長徑×短徑2
,繪出腫瘤生長圖

(八)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±s)表示,實(shí)驗(yàn)資料采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包處理

結(jié) 果

(一)瘤重和抑瘤率

消癌根對S180移植性腫瘤的抑制作用

。消癌根高劑量組和消癌根低劑量組與陰性對照組比較,其瘤重均顯著減輕(P﹤0.05)
;消癌根高劑量組的瘤重與消癌根低劑量組比較亦明顯減輕(P﹤0.05)
;消癌根高劑量組與環(huán)磷酰胺組比較其瘤重有顯著性差異(P﹤0.05);環(huán)磷酰胺組抑瘤率最高

(二)腫瘤的生成曲線

以時(shí)間為橫軸

,腫瘤體積為縱軸繪制腫瘤的生長曲線

討論

(一)小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株S180細(xì)胞的選擇

國內(nèi)研究者對S180生物學(xué)特性、免疫學(xué)

、細(xì)胞系的建立及移植實(shí)驗(yàn)條件等方面做了較為深入的研究
。由于其造模時(shí)間短、接種成功率高的特點(diǎn)
,均一性好
,目前此模型已廣泛地用于腫瘤基礎(chǔ)研究及藥物篩選,成為研究中醫(yī)藥抗腫瘤的作用及機(jī)制的一個(gè)公認(rèn)的腫瘤模型

本實(shí)驗(yàn)采用購自中山醫(yī)科大學(xué)腫瘤研究所的S180細(xì)胞

,進(jìn)行小鼠皮下腫瘤造模。經(jīng)過對S180細(xì)胞的復(fù)蘇
、傳代
,右后肢臀部皮下接種,成功地造出44只荷瘤小鼠
,造模成功率達(dá)100%
。這一模型具有明顯外部特征,容易觀察
、測量皮下瘤塊的生長情況
,以反映出各實(shí)驗(yàn)組的藥效。另外
,本實(shí)驗(yàn)中的荷瘤小鼠皮下腫瘤易剝離
,以便較為精確地稱重、計(jì)算抑瘤率

(二)消癌根對腫瘤的抑制作用

本實(shí)驗(yàn)擬考察消癌根的抗腫瘤效果

,以S180荷瘤小鼠為實(shí)驗(yàn)對象,將環(huán)磷酰胺設(shè)為陽性對照藥
,生理鹽水組作為陰性對照組進(jìn)行操作
。環(huán)磷酰胺是臨床常用的化療藥,其能有效地殺傷癌細(xì)胞(本實(shí)驗(yàn)其抑瘤率達(dá)到45.6%)
。藥效方面
,消癌根高劑量組抑瘤率達(dá)到35.2%,消癌根低劑量組亦達(dá)到22.1%
,消癌根高劑量組平均瘤重與低劑量組平均瘤重存在顯著性差異(P﹤0.05)
。這說明消癌根在抗腫瘤方面有一定療效,并且存在著一定的量效趨勢

消癌根的抗腫瘤機(jī)理可能是通過抑制捐資血管生成來實(shí)現(xiàn)的

。將在以下實(shí)驗(yàn)中予以探討。

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