克隆性分析技術在分子病理學診斷領域前景廣闊

克隆性分析技術在分子病理學診斷領域前景廣闊

眾所周知，病理診斷是疾病診斷的金標準，然而在一些增生性病變的診斷中，常規(guī)病理診斷也存在一些難點。一些增生性病變經(jīng)常規(guī)病理診斷，性質(zhì)仍無法明確，如部分淋巴組織增生性病變；一些增生性病變的性質(zhì)目前仍然認識不清或存在爭議，如肝臟變異肝細胞結節(jié)及骨的纖維結構不良等。因此尋找更為精確的診斷依據(jù)是解決這些疑難病理診斷難點的關鍵。

在國家自然科學基金資助下，由第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院病理科主任、碩士研究生導師、醫(yī)學博士張偉教授領銜的攻關小組，歷經(jīng)8年時間，在一項題為“克隆性分析技術的建立及其在增生性病變病理診斷中的應用”的研究中，從分子水平為一些疑難或有爭議的疾病病變性質(zhì)提供了診斷依據(jù)，明確了一些增生性病變生還是反應性增生，提高了相關疑難病例病理診斷的準確性，有利于疾病特別是腫瘤性疾病的早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷。

多年來此系列研究結果已發(fā)表論著18篇，引起學術界的廣泛關注。日前，這一研究成果榮獲2007年度軍隊醫(yī)療成果二等獎。有關專家們稱該研究在國內(nèi)率先建立了基于女性X染色體PGK、AR基因位點多態(tài)性的克隆性分析技術和基因重排檢測技術，并結合顯微切割技術從分子水平明確增生性病變的克隆性，從而確定其是否為腫瘤性增生，在技術上為上述疑難病例的診斷提供精確的可靠依據(jù)。

該研究主要創(chuàng)新性成果包括：在國內(nèi)首先建立了基于女性X染色體PGK、AR基因位點多態(tài)性的克隆性分析技術，并首先將顯微切割技術應用于克隆性分析中。克隆性分析技術在國外上世紀70年代建立，但當時所用位點不穩(wěn)定且有局限性，上世紀90年代基于女性X染色體PGK、AR基因位點多態(tài)性的克隆性分析技術在國外開始建立，但只限于肉眼可以分辨的較大病變。該科于1998年在國內(nèi)率先建立該技術，并巧妙的與顯微切割技術相結合，提高了靶細胞的豐度和純度，廣泛應用到臨床病理診斷中；首次報道了多發(fā)性子宮平滑肌瘤各結節(jié)之間具有獨立型、同源型及混合型三種關系；首次提出部分女性外陰尖銳濕疣、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變、慢性乙型肝炎和肝硬化組織中變異肝細胞結節(jié)及全部骨的纖維結構不良是單克隆性增生，屬于腫瘤性病變；建立了基因重排檢測技術，有效提高了對于淋巴細胞增生性病變性質(zhì)分析的準確性。淋巴瘤的診斷是病理診斷中的難點，而且爭議很大，該項目明確部分有爭議淋巴組織增生性病變基因重排檢測陽性，屬于早期淋巴瘤。

自1998年來，張偉教授領銜的科研小組對包括女性外陰尖銳濕疣、宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變、淋巴組織增生性病變、慢性乙型肝炎和肝硬化組織中變異肝細胞結節(jié)、骨的纖維結構不良、多發(fā)性子宮平滑肌瘤在內(nèi)的461個病例的病理診斷進行了輔助診斷，經(jīng)隨訪結果證實診斷符合率達到100%，明顯提高了疑難病理診斷的準確性。

病理技術的分子診斷技術

通過從分子水平上完成DNA、RNA或蛋白質(zhì)檢測，從而對疾病作出診斷的方法稱為分子診斷技術，常用的方法有基因診斷和腫瘤標志物檢測。
1.基因診斷 用分子生物學的理論和技術，通過直接探查基因的存在狀態(tài)或缺陷，從基因結構、定位、復制、轉錄或翻譯水平分析基因的功能，從而對人體狀態(tài)與疾病作出診斷的方法?；蛟\斷不僅能對某些疾病作出確切的診斷，如確定某些遺傳病，也能確定基因與疾病有關聯(lián)的狀態(tài)，如對疾病的易感性、發(fā)病類型和階段的確定等。基因診斷的主要技術有核酸分子雜交（原位雜交、southern雜交、Northern雜交、斑點雜交等）、PCR和生物芯片技術。
2.腫瘤標志物檢測 是指腫瘤細胞和組織由于相關基因或異常結構的相關基因的表達所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)和生物活性物質(zhì)，在正常組織中不產(chǎn)生或產(chǎn)量甚微，而在腫瘤病人組織、體液和排泄物中可檢測到。此外，在病人機體中，由于腫瘤組織浸潤正常組織，引起機體免疫功能和代謝異常，產(chǎn)生一些生物活性物質(zhì)和因子，雖然這些物質(zhì)和因子特異性低，但與腫瘤發(fā)生和發(fā)展有關，也可用于腫瘤輔助診斷。腫瘤標志物分別有：原位性腫瘤相關物質(zhì)、異位性腫瘤相關物質(zhì)、胎盤和胎兒性腫瘤相關物質(zhì)、病毒性腫瘤相關物質(zhì)，癌基因、抑癌基因及其產(chǎn)物等。腫瘤標志物測定方法包括：生物化學法、免疫組化法、單克隆抗體法。

分子診斷學簡介

目錄1拼音2概述3分子診斷學的發(fā)展歷史4分子診斷學的發(fā)展方向 1拼音 fēn zǐ zhěn duàn xué

2概述 分子診斷學是以分子生物學理論為基礎，利用分子生物學的技術和方法研究人體內(nèi)源性或外源性生物大分子和大分子體系的存在、結構或表達調(diào)控的變化，為疾病的預防、預測、診斷、治療和轉歸提供信息和決策依據(jù)。

分子診斷（molecular?diagnosis）狹義上是指基于核酸的診斷（nucleic?acidbased?diagnosis），即對各種DNA和/或RNA樣本的病原性突變的檢測以便實現(xiàn)對疾病的檢測和診斷。

隨著第一張人類基因組測序圖以及隨后的其他生物基因組測序圖的發(fā)表，分子診斷學已進入了一個有著空前機會和挑戰(zhàn)的新時代。

而在后基因組時代，隨著蛋白質(zhì)組學研究的實施，功能基因組及其相關的表達產(chǎn)物與疾病聯(lián)系的謎團被破解，分子診斷又賦予了新的外延：分子診斷的對象包括基因及其相關的表達產(chǎn)物：生物大分子。

在廣義上包括基因治療和生物治療以及針對某些信號轉導分子的分子靶向治療。在過去的幾十年里，在治療包括某些遺傳性免疫缺陷尤其是腫瘤性疾病方面顯示了獨特的效果。蛋白質(zhì)組學的發(fā)展，成為分子診斷的一個必不可少的工具。比如，與癌變相關的DNA、RNA、蛋白質(zhì)、染色體以及細胞變化譜等將會逐漸被人們所認識，將會出現(xiàn)與腫瘤發(fā)生、發(fā)展相關的基因突變譜、基因甲基化譜、基因多肽譜、基因表達譜、體液蛋白質(zhì)（或其他化學成分譜）、染色體譜以及細胞和組織器官的分子影像譜圖等。這些變化譜將會成為腫瘤標志譜，更準確地用于指導腫瘤的預防、診斷和治療。

3分子診斷學的發(fā)展歷史 20世紀50年代Watson和Crick提出了DNA雙螺旋結構模型，標志著分子生物學作為一門獨立學科的誕生，70年代以來，分子生物學已成為生命科學領域最具有活力的學科前沿。由于分子生物學理論和技術方法不斷地被應用于臨床，在疾病和預防、預測、診斷、療效地評價等多方面發(fā)揮著愈來愈重要的作用。分子生物學與臨床醫(yī)學的廣泛交叉和滲透，產(chǎn)生了一個嶄新的學科方向—分子醫(yī)學;70年代末，美國科學院院士美籍華裔科學家Kan等應用液相DNA分子雜交成功地進行了鐮形細胞貧血癥的基因診斷，標志著檢驗診斷進入基因診斷時代，由于基因診斷是從疾病基因或與致病相關的基因及其表達產(chǎn)物的水平上進行檢測，因此實現(xiàn)了疾病的早期診斷，但由于基因診斷方法以現(xiàn)代分子生物學技術為基礎并有機整合了細胞學、遺傳學等技術，使基因診斷更具有先進性，精確性和快速，因此大大提高了診斷的特異性和靈敏度。

長期以來，疾病的診斷主要依據(jù)病史、癥狀、體征和各種輔助檢查，如血液學、病理學、免疫學、微生物學、寄生蟲學乃至物理學檢查等。然而，上述檢查方法都具有其各自的局限性，使得許多疾病未能被及時準確地診斷，從而延誤了治療良機。因為許多外科疾病在病人出現(xiàn)癥狀、體征及生化改變之前就已存在相當一段時間，所以人們一直在盼望能找到一種技術，在疾病一旦發(fā)生，甚至尚未出現(xiàn)癥狀、體征及生化改變之前，就能做出診斷;對于某些可能的致病因素，包括食品、水質(zhì)、環(huán)境中存在的病原體，人們也期望能有簡單準確的方法及時進行檢測。隨著基因診斷技術的不斷改進和日臻成熟，其涉及領域和應用范圍不斷擴大，特別是80?年代中期聚合酶?鏈反應（PCR）技術的問世以及90年代初人類基因組計劃的啟動，進一步推動了基因診斷技術的發(fā)展。分子生物學技術的發(fā)展使人們渴望已久的上述愿望得以實現(xiàn)，1999年11月，美國研究病理學會和分子病理學協(xié)會創(chuàng)刊出版了《The?Journal?of?Molecular?Diagnostics》雜志，標志著這種在分子生物學理論和技術發(fā)展基礎上建立起來的一門全新的診斷技術已經(jīng)發(fā)展成為一個成熟的學科——分子診斷學。

回顧分子診斷學20余年的發(fā)展歷史，大致經(jīng)歷了3個階段：

（1）利用DNA分子雜交技術進行遺傳病的基因診斷;

（2）以PCR技術為基礎的DNA診斷，特別是定量PCR?和實時PCR的應用，不僅可以檢測存在于宿主的多種DNA和RNA病原體載量，還可檢測多基因遺傳病細胞中mRNA的表達量。

（3）以生物芯片（biochip）技術為代表的高通量密集型檢測技術，生物芯片技術包括基因芯片，蛋白質(zhì)芯片，組織芯片等，由于其工作原理和結果處理過程突破了傳統(tǒng)的檢測方法，不僅具有樣品處理能力強、用途廣泛、自動化程度高等特點，而且具有廣闊和應用前景和商業(yè)價值，因此成為分子診斷技術領域的一大熱點。

4分子診斷學的發(fā)展方向 分子診斷學的發(fā)展歷史已揭示了其發(fā)展方向：

1）分子診斷的內(nèi)容從傳統(tǒng)的DNA診斷發(fā)展到核酸及其表達產(chǎn)物（mRNA、蛋白質(zhì)）的全面診斷;

2）分子診斷的策略從利用分子雜交、PCR等單一技術的診斷發(fā)展到有機組合多項技術的聯(lián)合診斷;

3）分子診斷的方法從定性診斷發(fā)展到半定量和定量診斷，核酸標記技術，特別是熒光標記技術的發(fā)展，熒光定量PCR?技術等方法日益成熟;

4）分子診斷的范圍從單基因疾?。ㄩT德爾遺傳性疾病，諸如白血病、早老癥、血紅蛋白病、甲型肝炎病毒，人類免疫缺陷病毒，人 *** 瘤病毒等）的診斷發(fā)展到多基因?。[瘤、心腦血管疾病、代謝病、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病等）的診斷;

本文地址:http://m.mcys1996.com/zhongyizatan/76871.html.

聲明： 我們致力于保護作者版權，注重分享，被刊用文章因無法核實真實出處，未能及時與作者取得聯(lián)系，或有版權異議的，請聯(lián)系管理員，我們會立即處理，本站部分文字與圖片資源來自于網(wǎng)絡，轉載是出于傳遞更多信息之目的,若有來源標注錯誤或侵犯了您的合法權益，請立即通知我們(管理員郵箱：douchuanxin@foxmail.com)，情況屬實，我們會第一時間予以刪除，并同時向您表示歉意,謝謝!

上一篇: 專家指出：服用膏方進補要講究

下一篇: 肺炎疫苗還可預防心梗發(fā)作