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    摸索新途徑提高靶向性——脂質(zhì)體與配體偶聯(lián)方法一覽

    醫(yī)案日記 2023-06-20 00:43:46

    脂質(zhì)體最早是在1965年被英國(guó)學(xué)者Bangham等作為研究生物膜的模型提出的。它是由脂質(zhì)雙分子層組成,內(nèi)部為水相的閉合囊泡。脂質(zhì)體的大小從幾十納米到幾十微米,在脂質(zhì)體的水相和膜內(nèi)可以包裹多種物質(zhì)。脂質(zhì)體一經(jīng)發(fā)現(xiàn),就引起了生物學(xué)家、藥學(xué)家的興趣。人們開始應(yīng)用脂質(zhì)體作為藥物的載體控制藥物的釋放,提高藥物靶向性,以減少藥物的毒副作用,提高藥物療效。目前,脂質(zhì)體的研究主要集中在四個(gè)領(lǐng)域:模擬膜的研究;藥物的可控釋放和體內(nèi)的靶向給藥;皮膚及化妝品等日用工業(yè)品的基質(zhì);基因及其他生理活性物質(zhì)向細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)。

    脂質(zhì)體的靶向性分為主動(dòng)靶向、被動(dòng)靶向和物理化學(xué)靶向三種。其中,主動(dòng)靶向是修飾脂質(zhì)體如微粒與配體(如單克隆抗體、縮氨酸、蛋白質(zhì)等)偶聯(lián),以提高藥物微粒的靶向性和與靶組織的結(jié)合親和力,增加藥物在靶組織中的沉積量。目前,脂質(zhì)體與配體偶聯(lián)的方法較多,科研人員也在不斷加以改進(jìn),以提高藥物的靶向性。

    非共價(jià)偶聯(lián)方法尚存不足

    配體與脂質(zhì)體偶聯(lián)主要有兩種方式:共價(jià)鍵與非共價(jià)鍵偶聯(lián)。其中,直接將配體加到磷脂中,通過混合制備脂質(zhì)體的方法稱為非共價(jià)偶聯(lián)法。它具有不需偶聯(lián)劑、制備簡(jiǎn)單的優(yōu)點(diǎn),但配體與脂質(zhì)體的結(jié)合率相對(duì)較低(4%~40%),脂質(zhì)體容易發(fā)生聚集,難以控制配體在脂質(zhì)體上的數(shù)量、分布以及配體結(jié)合位點(diǎn)等,且配體與脂質(zhì)體易分離。將半抗原與配體結(jié)合可提高配體與脂質(zhì)體的結(jié)合率,但仍未解決脂質(zhì)體與配體結(jié)合力弱、配體在脂質(zhì)體表面隨機(jī)分布等問題。

    共價(jià)偶聯(lián)方法較為看好

    而以共價(jià)鍵偶聯(lián)的方法較為常用,即將脂質(zhì)體上疏水基團(tuán)與配體以共價(jià)鍵結(jié)合。常用的疏水基團(tuán)供體有長(zhǎng)鏈脂肪酸(如棕櫚酸)和磷脂[如磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰纖維醇(PI)]。配體與脂質(zhì)體共價(jià)偶聯(lián)的方法有兩種:配體與偶聯(lián)劑反應(yīng),再與脂質(zhì)體反應(yīng),形成配體修飾脂質(zhì)體;偶聯(lián)劑與脂質(zhì)體反應(yīng),再與配體反應(yīng),將配體連接到脂質(zhì)體表面。

    配體與脂質(zhì)體以硫醚鍵偶聯(lián)

    蛋白質(zhì)中常含有巰基,巰基可與偶聯(lián)劑順丁烯二酰亞胺形成穩(wěn)定的硫醚鍵,借此蛋白質(zhì)配體與脂質(zhì)體偶聯(lián)。但有些蛋白質(zhì)上巰基缺乏或數(shù)量不足,需進(jìn)行修飾,以增加巰基的數(shù)量。N-羥基琥珀酰亞胺3-(2-吡啶二硫代基)丙酸酯(SPDP)和琥珀酰亞胺-S-乙?;虼宜狨ィ⊿ATA)便是常被用于增加巰基的化合物,它們含有一個(gè)伯氨基和被保護(hù)的巰基,其伯氨基先與配體蛋白質(zhì)結(jié)合后,采用二硫代蘇糖醇(DTT)或其他還原劑將被保護(hù)的巰基轉(zhuǎn)化成巰基,再與順丁烯二酰亞胺反應(yīng),形成硫醚鍵,使蛋白質(zhì)配體偶聯(lián)到脂質(zhì)體上。國(guó)外研究人員采用半胱氨酸修飾scFv抗體,增加配體的巰基,經(jīng)順丁烯二酰亞胺與脂質(zhì)體偶聯(lián),形成scFv抗體修飾免疫脂質(zhì)體,可與腫瘤組織產(chǎn)生的ED-B纖維結(jié)合蛋白特異性結(jié)合。

    配體與脂質(zhì)體以二硫鍵偶聯(lián)

    配體與脂質(zhì)體以二硫鍵偶聯(lián)是較容易的方法,但二硫鍵在血液中易被還原,使配體與脂質(zhì)體又分解。為了使配體與脂質(zhì)體形成穩(wěn)定的二硫鍵偶聯(lián),可增加配體上的巰基,以此來增加二硫鍵,提高配體與脂質(zhì)體偶聯(lián)的穩(wěn)定性。增加配體巰基的方法可將原有的二硫鍵還原成巰基或通過SATA、SPDP在配體上引入巰基。配體上的巰基與脂質(zhì)體上的磷脂酰乙醇胺-吡啶二硫代丙酰胺(PE-PDP)偶聯(lián)劑反應(yīng),即可形成配體-脂質(zhì)體的二硫鍵偶聯(lián)。國(guó)外研究人員采用該技術(shù)成功地將單克隆抗體[抗-GD(2)]Fab’片段與阿霉素脂質(zhì)體通過二硫鍵偶聯(lián),制成的配體-脂質(zhì)體具有人成神經(jīng)管細(xì)胞瘤靶向性。

    配體伯胺與脂質(zhì)體羧酸交叉偶聯(lián)

    配體上的伯胺可通過與脂質(zhì)體上偶聯(lián)劑末端的羧基反應(yīng)形成酰胺鍵偶聯(lián)。脂質(zhì)體上偶聯(lián)劑末端的羧基先與1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二酰亞胺(EDAC)反應(yīng),再與配體上的伯胺反應(yīng)形成酰胺鍵。常用的偶聯(lián)劑為二硬脂酸-N-[羧基丙酰基-(聚乙烯乙二醇)-琥珀酰]磷脂酰乙醇胺(DSPE-PEG-COOH),其末端羧基有一定長(zhǎng)度,空間位阻小,易與配體反應(yīng),且可避免配體變性而喪失抗原特異性。國(guó)外人員采用該方法制備的鐵傳遞蛋白(TF)-脂質(zhì)體可與小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞靶向結(jié)合,并在受體介導(dǎo)下被有效內(nèi)吞。另外,有人采用N-戊二基磷脂酰乙醇胺(NGPE)制備抗肌漿球蛋白抗體(AM)Fab’-脂質(zhì)體,F(xiàn)ab’片段與脂質(zhì)體的結(jié)合率為65%~75%,體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明,AMFab’-脂質(zhì)體可選擇性地沉積在血管梗死的心肌細(xì)胞上。

    配體與脂質(zhì)體羧基酯化偶聯(lián)

    配體上的羥基可與脂質(zhì)體聚乙二醇(PEG)衍生物鏈末端羧基通過酯化偶聯(lián)。國(guó)內(nèi)科研人員將末端帶羧基的二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)PEG衍生物(DPPE-PEG3000-COOH)結(jié)合于脂質(zhì)體中,制成長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體,再通過其羧基與配體上羥基的酯化作用,將膀胱癌單克隆抗體BDI-1或小鼠免疫球蛋白G(IgG)與脂質(zhì)體表面偶聯(lián),制成免疫脂質(zhì)體。體外靶細(xì)胞殺傷活性檢測(cè)和小鼠組織分布試驗(yàn)表明,該免疫脂質(zhì)體可選擇性殺傷人膀胱癌細(xì)胞EJ,減少脂質(zhì)體在肝、脾中的分布,延長(zhǎng)血中滯留時(shí)間。

    配體與脂質(zhì)體以腙鍵偶聯(lián)

    配體上的醛基可通過與脂質(zhì)體上酰肼基反應(yīng)以腙鍵偶聯(lián)到脂質(zhì)體表面。為了避免配體失去免疫活性,可采用半乳糖氧化酶或高碘酸在溫和的條件下,將配體即免疫球蛋白長(zhǎng)鏈上特定區(qū)域的糖基氧化成醛基,直接與脂質(zhì)體上的月桂酸酰肼反應(yīng),形成立體穩(wěn)定的靶向脂質(zhì)體。國(guó)外有人采用該方法制備了含抗癌前藥5-氟-2’-去氧尿嘧啶的大鼠結(jié)腸腺癌單克隆抗體(抗-CC531)免疫脂質(zhì)體。它可選擇性地轉(zhuǎn)運(yùn)到癌細(xì)胞表面,并內(nèi)吞入溶菌酶間質(zhì)。

    抗生物素蛋白-生物素配體與脂質(zhì)體偶聯(lián)

    抗生物素蛋白-生物素技術(shù)是制備藥物配體靶向制劑的一個(gè)非常有用的方法,它可分步將抗生物素蛋白和生物素偶聯(lián)到脂質(zhì)體上。偶聯(lián)后的抗生物素蛋白或生物素抗體仍具有免疫活性,且在短時(shí)間內(nèi)不被吞噬,能多途徑與靶細(xì)胞結(jié)合,增加靶向性。有研究人員首先制備了含生物素-氨基-乙酰基雙十六?;字R掖及返闹|(zhì)體,然后分別與生物素CA-125(CancerAntigen125)抗體和生物素蛋白鏈菌素抗體偶聯(lián),形成免疫脂質(zhì)體。體外實(shí)驗(yàn)表明,它可選擇性地結(jié)合到高表達(dá)CA-125抗原的OVCAR-3細(xì)胞上。

    在過去的幾十年,靶向脂質(zhì)體的研究成為先進(jìn)遞藥技術(shù)的熱點(diǎn)。無論從活性基團(tuán)的選擇、修飾方法的發(fā)明、靶向作用的檢測(cè),還是體內(nèi)藥代、藥效研究和臨床應(yīng)用都取得了非??上驳某煽?jī),特別是對(duì)于基因藥物制劑有著其他方法不可替代的優(yōu)點(diǎn)??梢灶A(yù)見,經(jīng)過人們的不斷努力和探索,將來一定可以做到定點(diǎn)、定時(shí)、定量控釋給藥,為臨床治療不同疾病提供更好的選擇。

    關(guān)于制備脂質(zhì)體的問題

    美國(guó)Genzyme人工合成磷脂在中國(guó)的長(zhǎng)期供應(yīng)商是西安瑞禧生物科技有限公司,以下資料由西安瑞禧科技提供。
    美國(guó)Genzyme公司磷脂類產(chǎn)品列表:
    DLPA,Na 1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-121
    DMPA,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt)LP-R4-024
    DPPA,Na1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt)LP-R4-025
    DSPA,Na1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphate (Sodium Salt) LP-R4-026
    DLPG,Na1,2-Dilauroyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)(Sodium Salt)
    DMPG,Na 1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
    DMPG,NH41,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3Phospho-rac(1-glycerol)Ammonium Salt)
    DPPG,Na1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
    DSPG,Na1,2-Distearoyl-sn-glycero-3[Phospho-rac-(1-glycerol)(Sodium Salt)
    DPPS,Na1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoserine (Sodium Salt)
    DSPE 1,2-Distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
    DPPE 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
    DOPE 1,2-Dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
    DMPE1,2-Dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine
    DPPC1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
    DPPC1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine
    注:以上磷脂純度≥99%
    公司:西安瑞禧生物科技有限公司

    藥物制劑新技術(shù)在現(xiàn)代中藥研究中的應(yīng)用

    大量關(guān)于藥物制劑的新技術(shù)、新方法的出現(xiàn)為中藥現(xiàn)代化提供了有效的技術(shù)手段,為實(shí)現(xiàn)中藥的“三小”(劑量小、毒性小和不良反應(yīng)小)“三效”(速效、高效、長(zhǎng)效)和“五方便”(生產(chǎn)、運(yùn)輸、貯存、攜帶和服用方便)提供了可以借鑒的思路。筆者對(duì)近年來研究較多的分子包合技術(shù)、脂質(zhì)體技術(shù)、固體分散技術(shù)、固體脂質(zhì)納米粒( SLN)技術(shù)、聚合物納米粒技術(shù)、微乳技術(shù)等藥物制劑新技術(shù)及其在現(xiàn)代中藥研究中的應(yīng)用作一綜述。

    1 分子包合技術(shù) 
    分子包合技術(shù)主要指的是環(huán)糊精包合技術(shù)。環(huán)糊精( cyclodextrin , CD)的結(jié)構(gòu)為內(nèi)徑016~110 nm環(huán)狀中空的內(nèi)疏水外親水的圓筒狀分子。形狀和大小適合的親脂性分子或基團(tuán)能進(jìn)入空腔,通過弱相互作用力形成超分子包合物。這種超分子包合物一方面可改善藥物的多種理化性質(zhì)和提高藥物的生物活性,如增加藥物的水溶性和穩(wěn)定性、提高靶向性、促進(jìn)透膜吸收、減少不良反應(yīng)和刺激性、提高生物利用度等 ,另一方面環(huán)糊精分子使藥物處于納米級(jí)的分散狀態(tài),擴(kuò)大了藥物的吸收面積,并且具有緩釋的效果。
    許多從中藥材中提取的有效成分和有效部位為疏水性物質(zhì),環(huán)糊精分子的內(nèi)疏水外親水結(jié)構(gòu)可顯著地增加這些物質(zhì)的溶解度。齊墩果酸的β-環(huán)糊精包合物可使溶解度提高12倍,累積溶出率增大6倍。揮發(fā)油是中藥中常用的一類化合物,但由于其高揮發(fā)性使其應(yīng)用受到限制,利用環(huán)糊精分子的包合功能可有效地克服該缺點(diǎn)。纈草油是中藥痙痛定的主要成分之一,但其揮發(fā)性強(qiáng),對(duì)光敏感,對(duì)光和熱不穩(wěn)定,且油狀液不易制粒。采用β-環(huán)糊精包合后,在加速試驗(yàn)的條件下其穩(wěn)定性明顯提高。環(huán)糊精不僅可以單獨(dú)用于制備納米載藥系統(tǒng),也可與其他載藥系統(tǒng)聯(lián)合應(yīng)用,以達(dá)到進(jìn)一步提高療效,降低毒性的目的。環(huán)糊精在聚合物納米載藥系統(tǒng)中的應(yīng)用也可得到類似的結(jié)果。可以預(yù)期,這些技術(shù)在中藥疏水性有效成分或有效部位的應(yīng)用同樣會(huì)取得良好的效果。

    2 脂質(zhì)體技術(shù) 
    脂質(zhì)體用于藥物載體的研究已經(jīng)有三十余年的歷史,技術(shù)已相對(duì)成熟。脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)同樣具有藥物的緩釋和靶向特性,增加藥物在體內(nèi)外的穩(wěn)定性,降低藥物的毒性,提高藥物治療指數(shù)的作用。與其他載藥系統(tǒng)相比,脂質(zhì)體所具有的結(jié)構(gòu)可修飾性使開發(fā)具有特殊功能的載藥系統(tǒng)如靶敏感脂質(zhì)體、隱形脂質(zhì)體、免疫脂質(zhì)體成為可能。脂質(zhì)體的粒徑一般在幾十納米到幾十微米之間, 納米尺度的脂質(zhì)體具有很高的穩(wěn)定性。
    20~50 nm的單層脂質(zhì)體進(jìn)入人體后,能增加藥物在靶區(qū)的聚集,并能延長(zhǎng)其在血液中的半衰期。脂質(zhì)體的制備方法主要有超聲分散法、微乳法、注入法及逆相蒸發(fā)法等。
    脂質(zhì)體用于中藥制劑中的研究有一些報(bào)道。張中冕等制備了豬苓多糖脂質(zhì)體并進(jìn)行抗肝轉(zhuǎn)移癌的研究,結(jié)果表明,脂質(zhì)體包裹同等劑量的豬苓多糖能顯著減少轉(zhuǎn)移性肝癌結(jié)節(jié)的數(shù)目( P < 0.01) 。采用適當(dāng)?shù)闹|(zhì)材料還可以制備成靶向性強(qiáng)的脂質(zhì)體。例如用含有pH敏感基團(tuán)的脂質(zhì)如二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)等制備的pH敏感脂質(zhì)體不僅可增加脂質(zhì)體的靶向性還可使其具有長(zhǎng)循環(huán)特征。用聚乙二醇( PEG)修飾可制成溫度敏感脂質(zhì)體、通過單抗與脂質(zhì)體連接可制成免疫脂質(zhì)體。并可聯(lián)合應(yīng)用制成具有雙重功能的脂質(zhì)體如pH敏感的免疫脂質(zhì)體等。這些研究為中藥脂質(zhì)體的研究提供了廣闊的思路。藥質(zhì)體作為特殊的脂質(zhì)類物質(zhì),藥物通過共價(jià)鍵與脂質(zhì)結(jié)合形成脂質(zhì)前藥,再按上述制備方法得到SLN。在藥質(zhì)體中藥物與脂質(zhì)形成的復(fù)合物既是活性成分又是載體,因而具有良好的生物相容性,可有效提高藥物對(duì)生物膜的穿透能力。通過制備中藥藥質(zhì)體的方法可促進(jìn)某些中藥的吸收,從而提高其生物利用度。

    3 固體分散技術(shù) 
    固體分散技術(shù)是指運(yùn)用固體分散技術(shù)將藥物高度分散于惰性的載體中,形成一種以固體形式存在的分散體。藥物在載體中以分子聚集體、微晶或無定形形式存在。固體分散技術(shù)可顯著地增加難溶性藥物的溶出,提高其生物利用度。ER-34122是一種新的脂氧合酶和環(huán)氧化酶雙重抑制藥,但其水溶性非常差, Kushida等將其制備成羥丙基甲基纖維素(HPMC)的固體分散體,其溶解速度和溶出率均顯著高于其物理混合物和純化合物。近年來,隨著技術(shù)的進(jìn)步,具有各種功能的輔料被用于固體分散技術(shù)中,使其應(yīng)用領(lǐng)域大大地拓展。單純應(yīng)用水溶性的輔料如聚乙烯吡咯烷酮( PVP) 、聚乙二醇( PEG) 、尿素等可以__改善難溶性藥物的溶出。加入難溶性的高分子材料如硬脂酸、乙基纖維素等可以使制備的固體分散體具有緩釋的特征,同時(shí)水溶性的藥物也可采用這種方式制備其緩釋劑型,擴(kuò)大了固體分散技術(shù)的應(yīng)用對(duì)象。采用腸溶性的輔料如丙烯酸樹酯、HPMC等可以制備定位于小腸釋放的固體分散體。固體分散體常用的制備方法有共沉淀法、熔融法和溶劑熔融法,近年來一些新的方法也被用于固體分散體的制備,如超臨界流體技術(shù)等。固體分散體為中間劑型,制備成固體分散體的藥物可根據(jù)需要進(jìn)一步制成片劑、膠囊、滴丸等制劑。
    固體分散技術(shù)在中藥的研究有著較廣泛的應(yīng)用,一般用于制備固體分散體的原料為中藥的有效成分和有效部位。水飛薊賓( silibinin) 是菊科植物水飛薊(S ilybum m arianum Gaertn.)果實(shí)中的一種黃酮成分,具有保肝、降血脂、抗氧化等諸多藥理活性,但由于它難溶于水,口服生物利用度低。鄧 莉等以尿素、PVP、泊洛沙姆188等為載體,用熔融法和共沉淀法制備水飛薊賓固體分散體,顯著提高了水飛薊賓的溶解度和溶出速度。固體分散體由于制備工藝相對(duì)簡(jiǎn)單,效果明顯已引起國(guó)內(nèi)中藥生產(chǎn)企業(yè)的廣泛關(guān)注,并在臨床上有廣泛的應(yīng)用。

    4 微乳技術(shù) 
    微乳由油、水、表面活性劑和助表面活性劑4部分組成,是一種粒徑在10~100 nm之間的乳滴分散在另一種液體中形成的各向同性熱力學(xué)穩(wěn)定膠體分散系統(tǒng)。體系中表面活性劑的量一般> 10%。微乳液中同時(shí)存在水相和油相,具有良好的溶解性能,既能溶解非極性的疏水性藥物,又能溶解極性的親水性藥物。根據(jù)油相和水相及乳化劑的性質(zhì)和配比的不同,分別能形成油包水(W /O)和水包油(O /W)兩種微乳液形式。因此,微乳作為納米給藥系統(tǒng),可以增加難溶性藥物的溶解度,提高水溶性藥物的穩(wěn)定性,提高藥物的生物利用度,同時(shí)使藥物具有緩釋功能,降低藥物的毒性。如Brime等制備了兩性霉素B 的微乳,其半數(shù)致死量較同等劑量的常規(guī)制劑提高1倍多。
    微乳的制備理論上不需要外力做功,即使在實(shí)際制備中也只需施加適當(dāng)?shù)耐饬纯?從而避免了高速攪拌、高剪切及高溫等劇烈的條件,可有效地防止不耐高溫的藥物等的降解,并適合于工業(yè)化的制備。微乳具有較高的擴(kuò)散性和皮膚滲透性,使其在透皮吸收制劑的研究方面受到極大關(guān)注。微乳技術(shù)在中藥的外用制劑中具有較廣闊的應(yīng)用前景,吳永良等將含有紅花、川芎、乳香、沒藥、當(dāng)歸 onmouseover="this.style.cursor=’hand’" onclick=當(dāng)歸_search11() value="當(dāng)歸">當(dāng)歸、樟腦、冰片等成分的油搽劑制備了用于外用的穩(wěn)定的微乳劑型。注射用的中藥乳劑如欖香烯乳注射液、薏以仁注射用乳劑等已有研究和應(yīng)用報(bào)道,但注射用中藥微乳筆者尚未見報(bào)道,根據(jù)微乳的特點(diǎn),制備注射用的中藥微乳應(yīng)是可行的。

    5 SLN技術(shù) 
    SLN是由固體脂質(zhì)制備的粒徑在50~1 000 nm的納米及亞微米載藥系統(tǒng)。SLN常溫下為固態(tài),非毒性的表面活性劑如泊洛沙姆、卵磷脂等可用來穩(wěn)定其結(jié)構(gòu)。可采用已成熟的高壓乳勻法進(jìn)行制備,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。另外,這種方法不使用有機(jī)溶劑,可以避免因有機(jī)溶劑殘留而導(dǎo)致的潛在毒性。同時(shí), SLN還具有藥物控釋和靶向特性,較高的載藥量,改善藥物的穩(wěn)定性等優(yōu)點(diǎn)。用于SLN制備的類脂材料有各種飽和脂肪酸如硬脂酸、棕櫚酸、癸酸及其三酰、二酰、單酰甘油酯;表面活性劑有各種卵磷脂、泊洛沙姆系列、聚山梨醇酯、膽酸類、丁醇等。SLN的制備方法有超聲或高剪切乳勻法、高壓乳勻法、溶劑乳化蒸發(fā)法、微乳法等。陳大兵等以硬脂酸為載體材料制備了長(zhǎng)循環(huán)的紫杉醇Brij固態(tài)脂質(zhì)納米粒(Brij-SLN)和PoronicF68固態(tài)脂質(zhì)納米粒( F68-SLN) ,延長(zhǎng)了紫杉醇于體內(nèi)的滯留時(shí)間。

    6 聚合物納米粒技術(shù) 
    聚合物納米粒是以人工合成或天然的可生物降解的高分子材料為載體制成的粒徑在1~1 000 nm的載體系統(tǒng)。聚合物由于結(jié)構(gòu)的可修飾性,在納米給藥系統(tǒng)的研究中占有重要的地位。藥物包裹于載體材料中所形成的高分子納米粒可以改變藥物的體內(nèi)分布,具有控釋和靶向特性,增加藥物的穩(wěn)定性,提高藥物的生物利用度。納米粒在進(jìn)入體循環(huán)后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)所吞噬,這為治療RES系統(tǒng)豐富的器官和組織如肝、脾、骨髓的疾病創(chuàng)造了條件。另一方面,對(duì)于非RES系統(tǒng)的靶向給藥,可以通過親水性高分子鏈段修飾等隱形技術(shù)、抗體包裹技術(shù)或體外磁性導(dǎo)向技術(shù)等方法,減少RES系統(tǒng)對(duì)納米粒的吞噬,延長(zhǎng)體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間。
    作為聚合物納米粒的材料有聚乳酸( PLA) 、聚乙交酯( PLG) 、聚氰基丙烯酸酯系列( PCA) 、聚己內(nèi)酯( PCL) 、聚乳酸2乙醇酸共聚物( PLGA) 、清蛋白、凝膠和殼聚糖等。制備方法主要有高分子分散法和單體聚合法兩大類,包括溶劑乳蒸發(fā)法、超臨界流體法、界面聚合法、鹽析法等。Storm等用可生物降解的聚酐制備的喜樹堿聚合物經(jīng)顱內(nèi)植入,可顯著地延長(zhǎng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤大鼠的存活時(shí)間。聚合物粒子經(jīng)過適當(dāng)?shù)男揎?還可制成能根據(jù)人體晝夜節(jié)律的變化而發(fā)揮作用的脈沖給藥系統(tǒng)和自調(diào)節(jié)給藥系統(tǒng),如pH反應(yīng)性及糖反應(yīng)性的給藥系統(tǒng)。也可修飾成受外界條件調(diào)節(jié)控制的給藥系統(tǒng)如磁控制、熱控制、超聲控制給藥系統(tǒng)等。

    7 結(jié)束語(yǔ) 
    綜上所述,利用藥物制劑新技術(shù),開發(fā)中藥的新制劑,可望解決中藥劑型存在的生物利用度低、毒性等問題,目前所研究的藥物制劑新技術(shù)對(duì)現(xiàn)代中藥的研究在一定程度上具有可移植性。同時(shí),由于這些技術(shù)中諸如脂質(zhì)體技術(shù)、分子包合技術(shù)、固體分散技術(shù)及微乳技術(shù)和SLN中所采用的高壓乳勻技術(shù)等已較為成熟,將這些技術(shù)應(yīng)用于中藥納米新劑型的開發(fā),技術(shù)上是可行的。

    還不了解脂質(zhì)體?一文帶你通關(guān)!

    說起最近醫(yī)藥界的“頂流”,就不得不提mRNA疫苗。

    <figcaption style="margin-top: calc(0.666667em); padding: 0px 1em; font-size: 0.9em; line-height: 1.5; text-align: center; color: rgb(153, 153, 153);">聯(lián)系電話:15201316651(微信同號(hào))</figcaption>

    mRNA疫苗是一類新型核酸疫苗,此類疫苗不需要進(jìn)入細(xì)胞核,沒有整合到基因組的風(fēng)險(xiǎn)。但是,mRNA也存在著易被核酸酶降解的缺點(diǎn)。因此,選擇一個(gè)合適的遞送載體對(duì)mRNA疫苗來說十分重要。其中,以脂質(zhì)體為載體的mRNA疫苗遞送系統(tǒng)憑借其靶向性強(qiáng)、包封率高、細(xì)胞親和性好的特點(diǎn),倍受關(guān)注。

    脂質(zhì)體(Liposomes)的概念最早于1965年由Bangham等人提出,現(xiàn)在普遍指將磷脂等類脂質(zhì)分散于水中所形成的具有雙分子層包裹水相結(jié)構(gòu)的封閉小囊泡,因其結(jié)構(gòu)與生物膜類似,故又可稱之為人工生物膜(artificial biological membrane)。作為基于脂質(zhì)的藥物載體,脂質(zhì)體受到廣泛的重視和研究,不僅因?yàn)槠渲饕苽湓狭字侨梭w細(xì)胞的固有組分,使脂質(zhì)體有良好的生物相容性而沒有免疫原性,而且脂質(zhì)體可制備為納米級(jí)的顆粒,使其更容易透過血管壁和細(xì)胞膜等生物屏障。

    (一)滴!萬(wàn)能卡

    目前,除了mRNA疫苗遞送,脂質(zhì)體被廣泛運(yùn)用在各大疾病治療領(lǐng)域。

    1. 腫瘤治療領(lǐng)域

    腫瘤細(xì)胞侵襲力強(qiáng),破壞性大且與正常細(xì)胞的相似性高,所以治療難度很大,一直以來抗腫瘤研究都是醫(yī)藥界重點(diǎn)探討攻克的難題。脂質(zhì)體憑借其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)在癌癥治療中顯示出了巨大的潛力。多年來,隨著研究的深入,脂質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體的治療途徑和方法也越來越廣泛,并形成了具有階段性特征的發(fā)展進(jìn)程。

    2. 抗炎、抗感染藥物載體

    以結(jié)核病的治療為例,利福平——治療肺結(jié)核的首選藥物,可以制備成利福平脂質(zhì)體氣霧劑,通過肺部給藥的方式,使藥物在肺部均勻沉積,增加藥物在肺部的滯留量,延長(zhǎng)釋藥過程,防止局部刺激,從而增加療效,減少肺外副作用。

    3. 眼部疾病治療領(lǐng)域

    開發(fā)能夠?qū)⒂H水性和疏水性藥物傳遞到眼睛內(nèi)部結(jié)構(gòu)并恢復(fù)眼前淚膜的眼用制劑,是近年來討論的前沿課題。將眼用藥物制備成脂質(zhì)體,具有增加角膜通透性、緩釋和降低毒性反應(yīng)等優(yōu)點(diǎn)。

    4. 治療神經(jīng)退行性疾病

    對(duì)于類似于阿爾茨海默病和帕金森病的成人慢性神經(jīng)退行性疾病治療來講,跨血腦屏障( BBB )給藥是一個(gè)很大的挑戰(zhàn),而通過表面修飾BBB靶向配體的脂質(zhì)體,可以跨越BBB,達(dá)到治療阿爾茨海默病和帕金森病藥物的療效。

    5. 抗瘧

    抗瘧藥物水溶性差、滲透性低、生物利用度差,以及細(xì)胞內(nèi)寄生蟲的非特異性靶向性,導(dǎo)致劑量要求高,毒副作用大。脂質(zhì)體技術(shù)則可以高效地解決這些問題,并達(dá)到緩釋、控釋的作用,并且還可以降低耐藥進(jìn)展和減少不良反應(yīng)。

    除了以上這些疾病治療領(lǐng)域,脂質(zhì)體還可以用于中耳炎、哮喘、血栓等很多疾病的治療。

    (二)脂質(zhì)體的優(yōu)勢(shì)

    1. 載藥范圍廣

    脂溶性藥物可定位在雙分子層脂質(zhì)膜之間,兩親性藥物可定位在水相和膜內(nèi)部交界處的磷脂上,親水性藥物定位在水相中。

    2. 給藥途徑多樣

    除了最常見的注射給藥途徑,脂質(zhì)體還適用于口服給藥、眼部給藥、肺部吸入給藥以及經(jīng)皮給藥途徑。

    3. 具有靶向性

    普通脂質(zhì)體具有肝、脾組織靶向性,經(jīng)過單克隆抗體和其他抗體修飾后脂質(zhì)體可具有特定靶向性。

    4. 具有長(zhǎng)效性

    長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體可延長(zhǎng)藥物在血液中的滯留時(shí)間,有利于增長(zhǎng)藥效。

    5. 組織相容性好

    憑借與生物膜類似的結(jié)構(gòu),脂質(zhì)體有很好的細(xì)胞親和性和組織相容性,可長(zhǎng)時(shí)間吸附在靶細(xì)胞周圍,還可以直接進(jìn)入細(xì)胞,經(jīng)溶酶體消化釋放藥物。

    6. 可降低藥物毒性

    藥物被脂質(zhì)體包封后,在心、腎中累積量比游離藥物低得多,因此可將對(duì)心、腎具有毒性的藥物制備成脂質(zhì)體來達(dá)到降低藥物毒性的作用。

    7. 可提高藥物穩(wěn)定性

    對(duì)于一些在特定環(huán)境中不穩(wěn)定的藥物可受到脂質(zhì)體雙分子層的保護(hù),提高某些藥物的穩(wěn)定性。

    (三)脂質(zhì)體成“材”路

    脂質(zhì)體制備分兩步:第一選膜材,第二挑制備。

    畫重點(diǎn):你情我愿,彼此適合第一位。

    1.選膜材:

    脂質(zhì)體的膜材分為:

    (1)中性磷脂:磷脂酰膽堿(PC)是最常見的中性磷脂,是卵磷脂和大豆磷脂的主要組成成分。其中合成磷脂酰膽堿包括:二棕櫚酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰膽堿(DSPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)等。

    (2)荷負(fù)電的磷脂:又被稱為酸性磷脂,包括:磷脂酸(PA)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰肌醇(PI)等。

    (3)荷正電的磷脂:均為人工合成品,包括硬脂酰胺(SA)膽固醇衍生物等。

    (4)膽固醇(Ch):作為一種兩親性中性脂質(zhì),膽固醇能以高濃度方式滲入到磷脂膜中。

    2.挑制備:

    脂質(zhì)體的制備方法可分為主動(dòng)載藥法和被動(dòng)載藥法兩種。被動(dòng)載藥法中脂質(zhì)體的形成和藥物的裝載同步完成,而主動(dòng)載藥法則是先形成空白脂質(zhì)體再載入藥物。

    <figcaption style="margin-top: calc(0.666667em); padding: 0px 1em; font-size: 0.9em; line-height: 1.5; text-align: center; color: rgb(153, 153, 153);">脂質(zhì)體的制備方法匯總</figcaption>

    比較常用的制備方法:

    (1)溶劑注入法:溶劑注入法是比較常用的一種制備脂質(zhì)體的方法,一般可將膜材分散在乙醇或乙醚中,再將溶液注入藥物的水溶液中,揮盡溶劑后再勻化或超聲就可得到脂質(zhì)體。此方法相比于其他方法可以避免使用氯仿等有毒溶劑,并且以安全價(jià)廉的乙醇作為溶劑也更有利于大規(guī)模推廣。但是該法目前也還存在溶劑殘留難去除的問題。

    (2)薄膜分散法:薄膜分散法簡(jiǎn)單易操作,一般是將藥物溶于有機(jī)溶劑后,減壓除去溶劑,使脂質(zhì)在容器壁上形成薄膜,再加入含有水溶性藥物的緩沖溶液,充分振搖后得到脂質(zhì)體。但是此法要使用大量的有機(jī)溶劑,耗時(shí)長(zhǎng)。

    (3)逆向蒸發(fā)法:一般是將膜材的有機(jī)溶液與藥物水溶液超聲形成W/O型乳液,再減壓蒸發(fā),就可得到脂質(zhì)體。此法適用于水溶性藥物和大分子活性物質(zhì)。

    (4)冷凍干燥法:一般是將類脂質(zhì)高度分散在水溶液中,冷凍干燥后分散到藥物水溶液中,形成脂質(zhì)體。

    (四)成為更好的脂質(zhì)體

    作為藥物遞送領(lǐng)域的紅人,脂質(zhì)體的確可以稱得上是萬(wàn)能載體,但是它也有一些不得不提的缺點(diǎn)。多年的深入研究發(fā)現(xiàn),普通脂質(zhì)體存在包封率低、不穩(wěn)定、長(zhǎng)期貯存時(shí)藥物易產(chǎn)生泄漏等問題,正是這些問題抑制了脂質(zhì)體的進(jìn)一步發(fā)展。遇到問題就要解決,針對(duì)這些棘手的問題,科研人員進(jìn)一步提出了膜修飾脂質(zhì)體和復(fù)合磷脂脂質(zhì)體。

    1.膜修飾脂質(zhì)體

    脂質(zhì)體的表面經(jīng)過修飾后,可以進(jìn)一步提高其載藥效果,改善普通脂質(zhì)體中的現(xiàn)存問題。目前用于修飾脂質(zhì)體的材料主要有糖類及其衍生物、抗體類、聚合物類及肽類等。其中糖類及其衍生物、抗體類和肽類修飾后的脂質(zhì)體具有專一靶向性,能提高藥物的生物利用度;聚合物類修飾后的脂質(zhì)體可提高藥物的穩(wěn)定性,改善脂質(zhì)體長(zhǎng)期儲(chǔ)存過程中面臨的粒徑變大,絮凝等問題。目前廣泛使用的修飾材料有聚乙二醇、泊洛沙姆、殼聚糖和聚乙烯等高分子物質(zhì)。

    2.復(fù)合磷脂脂質(zhì)體

    復(fù)合磷脂脂質(zhì)體,即采用 2 種或 2 種以上不同相變溫度的磷脂材料作為膜材制備得到的脂質(zhì)體。在儲(chǔ)存和使用過程中,脂質(zhì)體雙分子層中同時(shí)存在膠晶相和液晶相,可將雙分子層分為若干個(gè)不連續(xù)的區(qū)域,與單一磷脂脂質(zhì)體(雙分子層中只存在一相)相比,復(fù)合磷脂脂質(zhì)體具有包封率和載藥量較高、穩(wěn)定性較好、長(zhǎng)期貯存時(shí)藥物不產(chǎn)生泄漏等優(yōu)點(diǎn),具有較好應(yīng)用前景。

    同時(shí)有研究表明,超聲處理可以增強(qiáng)脂質(zhì)體與細(xì)胞的相互作用,進(jìn)一步提高生物相容性,達(dá)到更高的生物利用度。

    (五)脂質(zhì)體產(chǎn)品

    目前國(guó)內(nèi)上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品主要為卵巢癌化療藥物紫杉醇注射劑、鹽酸多柔比星脂質(zhì)體注射液和注射用兩性霉素B脂質(zhì)體。可見目前上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品并不多,更多的脂質(zhì)體產(chǎn)品仍然處于臨床試驗(yàn)階段。

    [圖片上傳失敗...(image-a0bd6e-1646018078253)]

    <figcaption style="margin-top: calc(0.666667em); padding: 0px 1em; font-size: 0.9em; line-height: 1.5; text-align: center; color: rgb(153, 153, 153);">國(guó)內(nèi)上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品</figcaption>

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