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薄層層析法具體操作注意事項

醫(yī)案日記 2023-05-06 06:24:35

鋪板用的勻漿不宜過稠或過?div id="4qifd00" class="flower right">

。哼^稠
，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋
；過稀，水蒸發(fā)后
，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3
，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時間
，根據(jù)經驗來定
，與空氣濕度有關，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷
，越稠越難下滴
。勻漿的稀稠除影響板的平滑外
，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量
。涂層薄，點樣易過載
；涂層厚
，顯色不那么明顯
。通常，板的質量對薄層鑒別的影響不是很大
，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和
。

點樣

盡量用小的點樣管

。如果有足夠的耐性
，最好只用1微升的點樣管。樣
，點的斑點較小
，展開的色譜圖分離度好
，顏色分明
。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大
，點樣斑點擴散大
。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇
、甲醇
、氯仿
、乙酸乙酯
。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干
。

展開劑配制

選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗

，強烈振搖使混合液充分混勻
，放置，如果分層
，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應該把各組成溶液倒入展開缸
，振搖展開缸來配制展開劑
。混合不均勻和沒有分液的展開劑
，會造成層析的完全失敗
。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務有不同的要求
，盡量達到實驗室儀器的最高精確度
，比如：取1ml的溶劑
，應使用1ml的單標移液管
，移液管應符合計量認證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的
。

展開系統(tǒng)的飽和

一般使用的是雙槽的展開缸

，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸
。把待展開的板放入兩槽間的平臺
，斜架著，蓋上展開缸的蓋子
。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和
，防止邊沿效應，飽和時間在半小時左右
。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中
，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應該盡量輕
、快
。

溫濕度的控制

溫濕度對薄層影響都很大

。不凍結的前提下，通常溫度越低分離越好
，較難的分離需在低溫下分離
，例如人參皂苷。濕度的影響
，估計主要是影響薄層板的吸附能力
，導致選擇性（容量因子）的變化
，濕度應根據(jù)實際情況確定
。溫度控制使用空調器或冰柜
，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應濃度的硫酸
。

顯色

噴顯色劑顯色最重要是有好的霧化器。

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