靈芝多糖的提取

靈芝多糖的提取

近年來，藥理學(xué)和免疫學(xué)的多方研究表明，靈芝多糖芝扶正固本最有效的成分之一，具有廣泛的藥理活性，排毒、抗放射，提高肝臟、骨髓合成dna、bna的能力，抗腫瘤增強(qiáng)機(jī)體免疫等效果。因此多糖的提取為廣大科研人員藥研制者所重視，他們不斷研究和探索靈芝多糖提取的方為弄清靈芝多糖的化學(xué)成分提供有力的理論依據(jù)，同時(shí)為許多疾病帶來福音。

一、靈芝茵絲體多糖的提取

(一)材料

1．菌種：湖南省食用菌研究所提供的韓國靈芝母種。

2．種子培養(yǎng)基：玉米粉2％ 大米粉2％

蔗糖2％ 磷酸二氫鉀o.1g

硫酸鎂0.05％

ph值自然

3．發(fā)酵培養(yǎng)基：麥麩浸出液10％ 葡萄糖2％

硫酸銨0.2％

磷酸二氫鉀0.2％ ph值自然

(二)方法

1．種子培養(yǎng)：

2．發(fā)酵培養(yǎng)生產(chǎn)菌絲體。

3．測定干、濕菌絲體。

將發(fā)酵液進(jìn)行離心，然后取其沉淀物，加人60％蔗糖，進(jìn)行高速(3000轉(zhuǎn)／分)密度梯度離心5分鐘，取上層菌絲體，洗凈蔗糖再壓干，即得濕菌體，然后再將濕菌體于高溫下烘干即為干菌體。分別稱取其重量。

4．多糖的提取。

(1)菌絲體預(yù)處理。取適量的靈芝濕菌體，用乙醇等有機(jī)溶劑進(jìn)行處理，以除去濕菌體中的脂類物質(zhì)，同時(shí)使糖苷酶失去活性，防止多糖的降解。

(2)用熱水提取多糖。取上面經(jīng)預(yù)處理的靈芝濕菌體，放人1：20的熱水(95℃)中浸提，一次3小時(shí)，連續(xù)浸提3次，合并3次的水浸提液減壓、濃縮至一定體積，再用3倍體積的95％乙醇混合，靜置10－12小時(shí)，再離心，最后加入75％的乙醇反復(fù)洗滌，以沉淀多糖。此沉淀物為粗多糖，其中混雜有蛋白質(zhì)、色素、低聚糖等小分子雜質(zhì)，一般要經(jīng)過純化。

(3)多糖的純化，去蛋白質(zhì)和deae纖維素柱層析。去蛋白質(zhì)一般采用sevag法：加入0.2倍多糖溶液體積的氯仿和0.04倍體積的正丁醇混合振蕩半小時(shí)進(jìn)行分離，直至氯仿與水的界面無沉淀為止，且要重復(fù)處理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白質(zhì)。多糖純化一般采用硼酸型deae纖維素柱層析法：取脫蛋白后的多糖，分別以0.025mol／l、0.1mol/l的硼砂，0.1mol/l的氫氧化鈉溶液進(jìn)行洗脫，然后用0.2％恿銅硫酸液比色測定吸收度，收集有多糖的洗脫液，再濃縮脫鹽即得所需的多糖。

(4)多糖純度的鑒定。

可用電泳法進(jìn)行鑒定，如果存在單一帶，說明為純多糖。

5．多糖與多糖中蛋白質(zhì)含量的測定：

取一定量菌絲體粗多糖，加水煮沸溶解，用sevag方法脫去蛋白考馬斯亮蘭法測其粗多糖中蛋白質(zhì)和多糖的含量。測得菌絲體中粗多糖含17.01％、多糖含5.43％、蛋白質(zhì)含量2.16％。

二、靈芝子實(shí)體多糖的提取

(一)材料

1．菌種：韓國靈芝栽培種。

2．子實(shí)體栽培生產(chǎn)料：木屑78％，米糠20％，蔗糖1％，

石膏1％，ph值自然。

(二)方法

1．子實(shí)體栽培。

2．靈芝子實(shí)體預(yù)處理。

3．子實(shí)體多糖的提取。

取適量的靈芝子實(shí)體，搗碎成粉末，用80目篩過篩，然后用熱水提取法進(jìn)行提取。具體操作同菌絲體多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白質(zhì)等小分子雜質(zhì)，也須除去。

4．去除蛋白質(zhì)和色素。

子實(shí)體粗多糖去除蛋白質(zhì)也采用se陰法。去除色素，尚未發(fā)現(xiàn)很理想的方法。一般用乙醇進(jìn)行反復(fù)沖洗，但效果不很理想。

5．多糖純度的鑒定。

同菌絲體多糖純度的鑒定。

6．子實(shí)體粗多糖、多糖及蛋白質(zhì)含量的測定。

具體方法同菌絲體多糖及蛋白質(zhì)含量的測定。測得子實(shí)體中粗多糖7.5％、多糖1.5％，蛋白質(zhì)0.6％，其含量均低于菌絲體中的含量。可見菌絲體階段就形成了靈芝多糖的有效成分，為靈芝液體深層發(fā)酵生產(chǎn)菌絲體提供了科學(xué)依據(jù)。

靈芝多糖的功效和作用

靈芝多糖是多孔菌科靈芝屬真菌菌絲體的次生代謝產(chǎn)物，存在于靈芝屬真菌的菌絲體和子實(shí)體中。下面就由我為大家介紹下靈芝多糖的功效和作用，希望對大家有幫助。

靈芝多糖的功效和作用

1、免疫調(diào)節(jié) 經(jīng)腹腔注射或經(jīng)口服靈芝多糖，能增強(qiáng)對蛋白質(zhì)抗原延遲超過敏化。靈芝多糖能增強(qiáng)伴刀豆球蛋白A誘導(dǎo)白鼠T細(xì)胞擴(kuò)增。靈芝多糖能促進(jìn)T淋巴細(xì)胞的轉(zhuǎn)化而增強(qiáng)細(xì)胞免疫力;促進(jìn)淋巴細(xì)胞的形成反應(yīng)從而增強(qiáng)體液免疫力;增強(qiáng)淋巴細(xì)胞內(nèi)DNA聚合酶的活性，促進(jìn)細(xì)胞的增值、分裂，導(dǎo)致白細(xì)胞介素的合成和分泌，從而恢復(fù)因衰老而導(dǎo)致的免疫力下降。

2、抗腫瘤 靈芝多糖可以通過促進(jìn)白細(xì)胞介素-2的生成，通過促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能，通過提升人體的造血能力尤其是白細(xì)胞的指標(biāo)水平，以及通過其中某些有效成分對癌細(xì)胞起到抑制作用，成為抗腫瘤以及癌癥輔助治療的優(yōu)選藥物。通過對小鼠S180的實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)靈芝多糖的抑瘤率達(dá)57.4%，而且劑量和抑瘤率之間呈線性關(guān)系。研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖的抗腫瘤活性可能與其對宿主機(jī)能的影響有關(guān)，且水溶性多糖也可能起著更重要的作用，同時(shí)靈芝多糖有其合適的分子量范圍，分子量越大，抗腫瘤活性越強(qiáng)。 安普膠囊含有人參葉提取物主要包括人參皂苷單體RH2、RG3;靈芝提取物主要包括靈芝多糖;紅景天提取物主要包括紅景天苷。安普膠囊中含有人參皂苷單體Rh2、人參皂苷單體Rg3、人參皂苷單體Rg5、人參皂苷單體Rh1、人參皂苷CK、苷元其總和大于35%。以上成分均有很強(qiáng)的抗癌活性，并在癌癥不同的期間發(fā)揮作用。安普牌安普膠囊比純單一成分的人參皂苷單體作用更好，更安全，更有效。以上成分可治療各種癌癥、預(yù)防各種癌癥，效果顯著。

3、抗衰老 靈芝多糖能促進(jìn)血清、肝臟和骨髓的核酸及蛋白質(zhì)的生物合成，因此可以有效地抗病毒;靈芝多糖可顯著提高SOD活性，有效清除機(jī)體產(chǎn)生的自由基，從而阻止自由基對機(jī)體的損傷，防止機(jī)體的過氧化，保護(hù)了細(xì)胞組織，延緩了細(xì)胞衰老。靈芝多糖能顯著促進(jìn)細(xì)胞核內(nèi)DNA合成能力，并可增加細(xì)胞的分裂代數(shù)。這些作用都能延緩機(jī)體的衰老，所以，靈芝多糖的抗衰老功能十分強(qiáng)大。

4、保護(hù)心腦血管 有研究表明，靈芝的多糖有明顯的強(qiáng)心降壓作用，對動脈粥樣硬化有預(yù)防和治療作用。將靈芝多糖經(jīng)腹腔注射入正常小鼠，能降低血糖，其機(jī)理可能是由于提高了血漿胰島素水平，加快了葡萄糖的代謝，外組織和肝的葡萄糖利用加快，而達(dá)到降血糖的作用。有研究證實(shí)，靈芝多糖可有效地?cái)U(kuò)張冠狀動脈，增加冠脈血流量，改善心肌微循環(huán)，增強(qiáng)心肌氧和能量的供給，可明顯降低血膽固醇、脂蛋白和甘油三酯，并能預(yù)防動脈粥樣硬化半塊的形成。并可改善局部微循環(huán)，抑制血小板凝聚(其機(jī)制尚不清楚)。

5、保肝解毒 靈芝多糖能促進(jìn)肝臟對藥物、毒物的代謝，可明顯消除頭暈、乏力、惡心、肝區(qū)不適等癥狀，并可有效地改善肝功能，使各項(xiàng)指標(biāo)趨于正常。所以，靈芝多糖可用于治療慢性肝中毒、各類慢性肝炎、肝硬化、肝功能障礙等。

6、其它的藥用效果 對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)有較強(qiáng)的調(diào)節(jié)作用，具有鎮(zhèn)靜安神的功效，可改善睡眠。能延長和穩(wěn)定其它降壓藥物的效果。鎮(zhèn)咳、祛痰、平喘作用明顯，緩解慢性支氣管炎、支氣管哮喘癥狀、可阻斷過敏反應(yīng)介質(zhì)的釋放，減輕過敏反應(yīng)。保持和調(diào)節(jié)皮膚水分，恢復(fù)皮膚彈性，抑制皮膚中的黑色素的形成和沉淀。

靈芝怎么吃才更好的提取精華?

吃靈芝，首先要對靈芝有所了解，目前市場上的靈芝有野生靈芝和人工栽培靈芝，野生靈芝采摘的數(shù)量比較有限，野生靈芝無法收集孢子粉，而且有的野生靈芝有無毒性是無人去檢測的。人工栽培的靈芝在食用性和安全性方面是有標(biāo)準(zhǔn)的，可控制的，而且也能收集到靈芝的精華——靈芝孢子粉。
靈芝的有效成分大致有靈芝多糖、靈芝酸（靈芝三萜類)、靈芝總堿、靈芝纖維、酯類、微量元素等許多對人體有著重要的生理功效。而這些成分主要是水溶性成分（如靈芝多糖等)和醇溶性成分（如靈芝酸等）。所以日常保健吃靈芝要么煲湯或泡茶，要么泡酒，這樣兩者不能兼顧，有效成分不能充分的利用。
我建議你吃靈芝應(yīng)該服用靈芝子實(shí)體超細(xì)粉，因?yàn)檫@種粉的細(xì)度一般能達(dá)到280目，這樣的細(xì)度在人體內(nèi)能夠被充分的吸收和消化。孢子粉則要經(jīng)過破壁的。而用一般的粉碎機(jī)則不可能達(dá)到?，F(xiàn)在市場上到處都有買的靈芝超細(xì)粉和孢子粉，價(jià)格不等，質(zhì)量也參差不齊，應(yīng)該請教懂的人問問。

真菌多糖類有哪些功效？

分類:醫(yī)療健康
解析:

多糖(Polysaccharide)是由單糖之間脫水形成糖苷鍵,并以糖苷鍵線性或分枝連接而成的鏈狀聚合物。一般將多于20個(gè)糖基的糖鏈則稱為多糖。近年來，糖類結(jié)構(gòu)測定和生物活性研究取得了明顯的進(jìn)展，大量實(shí)驗(yàn)事實(shí)揭示糖類是重要信息分子，參與許多生理和病理過程，有關(guān)研究已滲誘到生物學(xué)各個(gè)領(lǐng)域[1]。研究表明,中藥多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖等多種功能。

1 免疫調(diào)節(jié)功能

1.1對細(xì)胞免疫的影響

多糖可以增加T、B淋巴細(xì)胞的殺傷功能。張秀娟等[2]報(bào)道靈芝多糖對T細(xì)胞及其亞群有明顯的影響,它可增加混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)中T細(xì)胞的回收量,在增加Lyt2+ 和L3T4+ 細(xì)胞回收量的同時(shí),還可增強(qiáng)細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL)的殺傷功能。張偉云[3]等用銅綠假單胞菌分離純化出胞外多糖（PEP）實(shí)驗(yàn)，得出PEP對小鼠胸腺淋巴細(xì)胞的增殖皆具有顯著的促進(jìn)作用，當(dāng)濃度為6．25mg/L時(shí)即有非常顯著的促進(jìn)作用的結(jié)論。
可以增加樹突狀細(xì)胞（DC）細(xì)胞前體細(xì)胞的數(shù)量。DC細(xì)胞是目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞（APC），它能攝取各類抗原,在機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫調(diào)控中均起著重要作用。何彥麗等[4]分析得出枸杞多糖、香菇多糖、云芝多糖等多種中藥多糖（主要由β-1,3糖苷鍵為主鏈的葡聚糖或雜聚糖組成）可增加淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的CSF(集落 *** 因子)活力，促進(jìn)骨髓有核細(xì)胞數(shù)和粒 / 巨噬細(xì)胞集落數(shù)量的增加(CFU-GM)，而DC細(xì)胞與單核、粒細(xì)胞、T、NK等細(xì)胞有共同的祖細(xì)胞，有可能同時(shí)增加DC前體細(xì)胞數(shù)量。

可以提高巨噬細(xì)胞（MΦ）的活性。MΦ是具有多種功能的重要免疫細(xì)胞，可通過處理抗原和釋放可溶性因子對免疫功能起重要的調(diào)節(jié)作用。關(guān)于多糖激活MΦ的機(jī)制，目前尚未完全清楚，但絕大多數(shù)中藥多糖都能促進(jìn)MΦ的吞噬功能。唐省三等[5]用猴頭菇、香菇、茯苓3種真菌的多糖，配以葡萄籽多酚和甘草酸，制成復(fù)合多糖，研究對荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞活性的影響，得與荷瘤模型組和香菇多糖組比較，復(fù)合多糖各組可明顯升高S180肉瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的活性，具有顯著性差異。姚金鳳[6]等的研究發(fā)現(xiàn)，海洋真菌多糖（YCP）可以明顯促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO，并呈一定的濃度相關(guān)性。隨藥物濃度升高,其誘生作用增強(qiáng)，另外，YCP還可以明顯促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌IL-1。

1.2 對體液免疫的影響

多糖可以促進(jìn)抗體的生成。陳麗芳[7]等報(bào)道香菇多糖能增加人體中外周單核細(xì)胞抗體的產(chǎn)生，裂褶菌多糖能促進(jìn)患者脾臟形成抗體的細(xì)胞增加。云芝多糖能使抗體下降的患者產(chǎn)生抗體，使其免疫能力恢復(fù)到正常水平。

多糖還可以恢復(fù)空斑形成細(xì)胞(PFC)的反應(yīng)。倪峰[8]報(bào)道靈芝多糖（5mg/kg）腹腔注射3天可明顯恢復(fù)降低的PFC反應(yīng)。

1.3 對細(xì)胞因子的影響

多糖可以促進(jìn)干擾素生成。干擾素是最先發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞因子，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、控制細(xì)胞增殖等重要作用。倪峰[8]報(bào)道用平蓋靈芝提取的多糖在體外可誘導(dǎo)Th細(xì)胞產(chǎn)生IFN，在體內(nèi)增強(qiáng)ConA誘導(dǎo)T淋巴細(xì)胞增殖效應(yīng)并產(chǎn)生IFN-α。

多糖還可以提高白細(xì)胞介素類（IL）的作用。倪峰[8]報(bào)道香菇多糖體內(nèi)外均可增加腹腔MΦ產(chǎn)生IL-1，體內(nèi)給藥數(shù)小時(shí)后可見血清CSF和IL-1明顯增加，且能提高免疫細(xì)胞對IL-2的敏感性。

1.4 對補(bǔ)體系統(tǒng)的影響

補(bǔ)體系統(tǒng)是機(jī)體重要的免疫系統(tǒng)。補(bǔ)體固有成分可被經(jīng)典和旁路途徑所激活。陳金煙等[9]報(bào)道香菇多糖也可以激活補(bǔ)體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑和替代途徑，導(dǎo)致MΦ的非特異細(xì)胞毒活性提高和嗜中性白細(xì)胞對腫瘤組織的浸潤。茯苓多糖能激活腫瘤鄰近的補(bǔ)體系統(tǒng)，協(xié)同吞噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞殺滅腫瘤細(xì)胞。

1.5 對紅細(xì)胞免疫的影響

劉景田等[10]用靈芝、茯苓等進(jìn)行試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)中藥多糖對紅細(xì)胞免疫有促進(jìn)和調(diào)節(jié)作用，作用機(jī)理是提高了紅細(xì)胞膜相CD35免疫活性,進(jìn)而促進(jìn)紅細(xì)胞與補(bǔ)體致敏酵母菌的粘附作用，從而使RBC.C3bRR（紅細(xì)胞C3b受體花環(huán)率）增高，從而達(dá)到調(diào)節(jié)和增強(qiáng)其紅細(xì)胞免疫功能的作用。

2. 抗腫瘤作用

2.1 抗腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作用

中藥多糖作為血管活性抑制劑發(fā)揮抗腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作用。汪效英等[11]試驗(yàn)得出靈芝多糖能顯著對抗血栓形成，減少血栓濕重，縮短血栓長度；顯著延長部分凝血活酶時(shí)間，抑制血小板聚集，但對血小板數(shù)無影響。大劑量還有降低纖維蛋白原含量，縮短凝血酶和凝血活酶時(shí)間的作用。

2.2 對S180肉瘤的抑制作用

唐省三等[5]用猴頭菇、香菇、茯苓3種真菌的多糖，配以葡萄籽多酚和甘草酸，制成復(fù)合多糖，研究復(fù)合真菌多糖對小鼠S180肉瘤的抑制作用，發(fā)現(xiàn)復(fù)合多糖Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組荷瘤和香菇多糖組動物的瘤重、抑瘤率、瘤體比與荷瘤模型組相比均有明顯的抑制作用。香菇多糖組亦有明顯的抑制作用，但遠(yuǎn)不及復(fù)合多糖各組的作用效果。

2.3 對B16腫瘤的抑制作用

張偉云[3]等用銅綠假單胞菌分離純化出胞外多糖（PEP）實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)PEP組對B16腫瘤細(xì)胞的生長皆有顯著的抑制作用，并且隨著濃度的增加，其抑制程度亦增加，當(dāng)濃度為6．25mg/L時(shí)，差異有顯著性；而當(dāng)濃度為12．5mg/L時(shí),其差異性有非常顯著性。

2.4 對Lewis 肺癌的抑制作用

孫賽[12]等發(fā)現(xiàn)從海洋真菌中分離出的一種多糖YCP，可明顯抑制Lewis肺癌的生長。

3. 降血糖作用

現(xiàn)己發(fā)現(xiàn)具有降血糖活性的真菌多糖有靈芝多糖、蟲草多糖、云芝多糖、銀耳多糖、毛木耳多糖、猴頭多糖和木耳多糖。Hidino等[13]從靈芝子實(shí)體中分離得到兩種具有降血糖活性的多糖Ganodetan A和 Ganodetan B，對正常小鼠及四氧嘧啶誘發(fā)的高血糖小鼠都有明顯降糖活性。

4. 抗病毒作用

真菌多糖的抗病毒作用主要是利用其結(jié)構(gòu)相似，通過免疫調(diào)節(jié)機(jī)制產(chǎn)生宿主免疫功能，以抗病原體的侵襲。許多研究證明，多糖對多種病毒，如艾滋病毒（HIV1）、單純孢疹病毒（HSV1，HSV2）、巨細(xì)胞病毒（CMV）、流感病毒、囊狀胃炎病毒（VSV）等有抑制作用[14]。另有研究表明，香菇多糖對泡狀口炎病毒感染引起的小鼠腦炎有顯著療效和預(yù)防作用，對阿伯耳氏病毒和十二型腺病毒感染也有效。裂褶菌多糖可提高感染仙臺病毒(sendai virus)小鼠的存活率，且有效抑制病毒的擴(kuò)散。帶有肽殘基的云芝硫酸酯化多糖抗愛滋病病毒（HIV），作用效果與SO42-基的量成明顯的比例關(guān)系。香菇多糖、靈芝多糖等對抗慢性肝炎也有顯著療效[15]。

5. 抗白血病作用

研究證明：雜色革蓋菌多糖、豬苓多糖、茯苓多糖有抗白血病的作用[16]。

6. 抗氧化作用

已發(fā)現(xiàn)許多真菌多糖具有清除自由基、提高抗氧化酶活性和抑制脂質(zhì)過氧化的活性，起到保護(hù)生物膜和延緩衰老的作用。從長白山野生云芝(coriolus versicolar)中提取的彩云多糖(cvPs)，給予荷瘤或受γ射線全身照射的小鼠，能使多種臟器和細(xì)胞內(nèi)soD活力升高、脂質(zhì)過氧化物(LipidPeroxide，LPO)水平下降[17]。

7. 展望

真菌多糖具有十分廣泛的藥理學(xué)活性，可以把它作為一種新保健食品的發(fā)展方向，或是一種新藥來源的開發(fā)研究方向。但是由于多糖的種類比較多，很難篩選出一種單體，對它的分離提純造成了很大的難度。在多種藥理學(xué)活性中還有很多作用機(jī)制并不清楚，而且在對其的毒理學(xué)特性、副作用方面的報(bào)道也并不多見。另外，真菌多糖作為一種植物藥材的來源，它的采收加工對其的作用影響甚大，尤其現(xiàn)在，人們對它的高級結(jié)構(gòu)還不了解，分離提純技術(shù)還不到位的情況下，植物的來源、采加等對其發(fā)揮它獨(dú)特的藥理作用有著重大的影響。

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自己以前寫的綜述

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