點評專家:張鶴曉(北京出入境檢驗檢疫局動物檢驗檢疫中心主任)
“現(xiàn)在國內(nèi)有些人談禽流感而色變,甚至不再吃與禽類相關(guān)的食物。對于禽流感我們要重視但不用恐懼它?!睆堹Q曉在接受記者采訪時,侃侃而談,“因為早在2001年我們就開始禽流感技術(shù)的研究并獲得成功。不但把檢測時間從原來的3周縮短到4小時,而且實現(xiàn)了養(yǎng)殖場環(huán)境的安全控制?!?/p>
據(jù)介紹,過去由于禽肉中禽流感病毒的快速檢測技術(shù)沒解決,對禽流感檢測最常用的方法是世界動物衛(wèi)生組織推薦的雞胚病毒分離法。由于檢測約需3周時間,加上樣品需要一定的前期處理過程,無法保證進出口禽肉在短時間內(nèi)通過檢疫后通關(guān)。雞胚病毒分離法不但不適應(yīng)我國進出口活禽及產(chǎn)品的快速檢驗、快速通關(guān)放行需要,也不適應(yīng)國內(nèi)消費者對禽肉安全性需求以及禽流感防控工作中對疫情的早發(fā)現(xiàn)和早確診。
“建立快速、敏感、特異的禽流感診斷技術(shù)并應(yīng)用到實際防治工作中去,才能真正解決‘一線’急需?!睆堹Q曉鄭重地告訴記者。
把疫情扼殺在搖籃中
2003年底,韓國、日本、越南、泰國等相繼爆發(fā)禽流感,并波及到10多個國家和地區(qū)。我國自2004—2005年初報告發(fā)生禽流感疫情以來,內(nèi)地確診禽流感的地區(qū)涉及16個省份。禽流感給我國的養(yǎng)禽業(yè)造成重大損失,不僅危害養(yǎng)雞業(yè),而且重創(chuàng)了部分地區(qū)的養(yǎng)鴨場和養(yǎng)鵝場。
高致病性禽流感的發(fā)生往往是突如其來的,發(fā)生后迅速蔓延,因此一旦發(fā)生后的防控工作非常艱巨,因此,必須對疫情早發(fā)現(xiàn)、早確診,并“把它扼殺在搖籃中”,禽流感病毒的快速檢測技術(shù),包括病毒的快速檢出和快速定型被列入“十五”科技攻關(guān)課題,并迅速獲得成功,投入了實際應(yīng)用。
課題組根據(jù)全球禽流感病毒流行特點和規(guī)律,先后建立了熒光RT-PCR快速檢測禽流感通用型、H5亞型、H7亞型、H9亞型方法,成功研制出4種禽流感病毒檢測試劑盒。在檢測靈敏度與雞胚病毒分離基本一致的情況下,將原來所需的21天檢測時間縮短為4小時,禽流感疫情的早發(fā)現(xiàn)、早確診,進出口活禽及禽類產(chǎn)品的快速檢測,快速通關(guān)終于成為了現(xiàn)實。在2005年的中美禽流感高層論壇上,美方專家為我國有此先進檢測技術(shù)感到驚訝,因為美國也剛剛將此技術(shù)作為美國禽流感病毒快速檢測的首選方法。
課題組自主研發(fā)的試劑盒通過了國內(nèi)權(quán)威部門所做的臨床試驗和符合試驗,于2005年2月取得了國家“一類新獸藥”證書,這表明該試劑盒在當(dāng)時為國內(nèi)外首創(chuàng),這也是我國檢驗檢疫系統(tǒng)唯一的“一類新獸藥”;課題組還制定了《禽流感病毒通用熒光RT-PCR檢測方法》、《H5亞型禽流感病毒熒光RT-PCR檢測方法》等四項國家標(biāo)準(zhǔn),并于2004年2月15日由國家質(zhì)檢總局和標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會公開發(fā)布。
敏感、特異又安全
禽流感檢測技術(shù)不但要快速,還要非常敏感,只有靈敏地檢測出污染了禽流感病毒的環(huán)境已經(jīng)被非常徹底地消毒了,才能避免再次進入其中的禽類一旦感染再次爆發(fā)疫病的可能。課題組研發(fā)的檢測技術(shù)實現(xiàn)了敏感、特異和安全性。
在動物的臟器中,病毒含量較多,肌肉中病毒含量相對較少,課題組研發(fā)的檢測技術(shù),由于采用了特異性的熒光探針和高靈敏度的熒光PCR儀,使該方法比傳統(tǒng)的PCR方法靈敏度高100—1000倍,即使是把發(fā)病的雞肉稀釋1萬倍,也能檢測出所含的微量禽流感病毒;快速檢測技術(shù)采用了特異性的引物和探針,其特異性高于傳統(tǒng)PCR方法,使它只限于檢測禽流感病毒,不能檢測其他病毒,避免了病毒交叉反應(yīng)而造成的檢測誤差;快速檢測技術(shù)還很安全,由于檢測是在殺死病毒后進行的,并且不對病毒進行增值,病毒不會擴散,在常規(guī)實驗室里都可以進行,而雞胚病毒分離法必須在生物安全3級實驗室里才能進行,應(yīng)用快速檢測技術(shù)的實驗室范圍大大擴大,成本也大量減少。
課題組還首次建立了2種敏感、特異的多重?zé)晒釸T-PCR檢測法。多重?zé)晒釸T-PCR同單管反應(yīng)相比,不僅提高效率,而且節(jié)約了成本。經(jīng)大量研究驗證建立了禽流感病毒H5/N1多重?zé)晒釸T-PCR檢測方法,實現(xiàn)了一次反應(yīng)中確定病毒是否為H5N1亞型;此外,通過將H5亞型和H7亞型檢測引物和探針進行正交試驗,經(jīng)優(yōu)化后,建立了禽流感病毒H5/H7亞型多重?zé)晒釸T-PCR檢測方法,實現(xiàn)了一次反應(yīng)中確定病毒是否為H5或H7亞型。2004年2月,禽流感快速檢測技術(shù)被科技部列為向全國首批推薦為22項禽流感防治技術(shù)之一。已經(jīng)推廣應(yīng)用試劑盒30萬余頭份,創(chuàng)造了較好的經(jīng)濟效益。在應(yīng)用本試劑盒對出口禽類進行檢測3年多以來,我國出口的禽產(chǎn)品從未被進口國檢出禽流感病毒,不但為養(yǎng)殖企業(yè)和廣大養(yǎng)殖戶創(chuàng)造了良好的經(jīng)濟效益,還支持了6億多美元的出口創(chuàng)匯。
至今,該試劑盒已在全國20多個出入境檢驗檢疫局、20多家檢疫機構(gòu)和24個出口大型養(yǎng)殖企業(yè)及7個省、地級獸醫(yī)站得到應(yīng)用,有些人醫(yī)疾病預(yù)防控制中心也采用了該技術(shù)來預(yù)防和檢測人感染禽流感。
解決的關(guān)鍵技術(shù)
課題組解決了禽肉中微量禽流感病毒的快速檢驗檢疫技術(shù)難題。該技術(shù)比常規(guī)RT-PCR和膠體金技術(shù)靈敏度高100-1000倍,其誕生有力地促進了禽肉進出口貿(mào)易,大大降低了進出口禽肉攜帶禽流感病毒的風(fēng)險。
解決了由于禽流感病毒亞型多,亞型檢測技術(shù)分別對樣品檢測較復(fù)雜的問題。建立了首先用禽流感病毒通用快速檢測技術(shù)進行檢測,然后對陽性樣品進行分型的禽流感病毒檢驗檢疫模式;解決了養(yǎng)禽場禽流感快速診斷技術(shù)問題,為養(yǎng)禽場禽流感的快速診斷進而采取相應(yīng)防治措施,減少經(jīng)濟損失提供了好方法。目前為止,僅課題組就已為100多個養(yǎng)禽場做出準(zhǔn)確、快速診斷。
為國家質(zhì)檢總局對日本交涉提供了依據(jù)。針對某公司出口鴨肉被日本檢出禽流感病毒問題,國家質(zhì)檢總局派調(diào)查組應(yīng)用熒光RT-PCR檢測禽流感病毒技術(shù),從采集的138份樣品中檢測出一份樣品禽流感病毒H5亞型陽性,后用雞胚分離出禽流感病毒,為質(zhì)檢總局決策提供了依據(jù)。雖然如今禽流感感染的速度在加快,宿主的范圍也在擴大,但總體來說病毒感染人的數(shù)量很少,只有極少數(shù)接觸禽流感病毒的人才會得病。但我們一定要重視禽流感問題,人們盡量不要接觸活禽,特別是有病的禽類,比如北京去年就已經(jīng)取消了活禽市場。為了避免人流感病毒和禽流感病毒的交叉混合感染,導(dǎo)致新的亞型產(chǎn)生,患了流感的病人尤其要注意不要接觸活禽和野生鳥類。
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