參松養(yǎng)心膠囊對心室肌細(xì)胞鉀通道的影響

醫(yī)案日記 2023-06-19 16:31:27

參松養(yǎng)心膠囊對心室肌細(xì)胞鉀通道的影響

編者按細(xì)胞膜離子通道結(jié)構(gòu)異常

、功能失調(diào)是產(chǎn)生心律失常的關(guān)鍵原因。目前的4類抗心律失常西藥：鈉、鈣離子通道阻滯劑，β受體阻滯劑和動作電位延時藥（以鉀通道阻滯劑為主）中，有的品種因具有抗心律失常藥的致心律失常副作用

，尤其是導(dǎo)致尖端扭轉(zhuǎn)性心律失常可致患者死亡率升高，加之其遠(yuǎn)期療效不佳

，這構(gòu)成了抗心律失常藥物臨床應(yīng)用和研發(fā)的瓶頸。只有能夠改善離子通道紊亂并恢復(fù)其正常生理功能的藥物

，才能阻止心律失常的發(fā)生并提高遠(yuǎn)期療效

。

為此，阜外心血管病醫(yī)院浦介麟教授等以膜片鉗技術(shù)為核心

，對心肌細(xì)胞離子通道蛋白的結(jié)構(gòu)

、功能及其與心律失常發(fā)生的關(guān)系進(jìn)行了深入研究

，并在參松養(yǎng)心膠囊對心室肌細(xì)胞鉀通道影響的最新研究中，探討了其治療心律失常的細(xì)胞電生理學(xué)作用機制

。他們的系列研究在第二屆國際絡(luò)病學(xué)大會上進(jìn)行了報告

。其研究結(jié)果證實，參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對豚鼠單個心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流(IKI)

、瞬時外向鉀電流（Ito）以及豚鼠心肌細(xì)胞延遲整流鉀電流（IK）均具有不同程度的阻滯作用

。他們繼對L 型鈣離子通道電流(ICa L)、鈉離子通道電流(INa)的研究之后

，再次揭示:參松養(yǎng)心膠囊的抗心律失常作用可能是通過對心肌細(xì)胞離子通道的影響來實現(xiàn)的

。

摘要

目的觀察參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對單個大鼠心室肌細(xì)胞內(nèi)向整流鉀電流(IKI)、瞬時外向鉀電流（Ito）以及豚鼠心肌細(xì)胞延遲整流鉀電流（IK）的影響

。

方法用酶解法分離單個心室肌細(xì)胞

，并用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄鉀通道電流。

結(jié)果當(dāng)藥物濃度為0.5%時,可以使大鼠心肌細(xì)胞IKI內(nèi)向成分降低

，使－100mV時IKI電流密度從(-10.78±1.80)pA/pF降至(-7.18±2.05)pA/pF

，平均抑制率為（33.1±16.85）%(n=11,P

結(jié)論參松養(yǎng)心膠囊干粉提取溶液對IKI、Ito和IK均具有不同程度的阻滯作用,這可能是其抗心律失常藥理機制的一部分

。

參松養(yǎng)心膠囊是由十幾種中藥組成的復(fù)方制劑

，方中多數(shù)藥物均有較好的抗心律失常作用。動物模型研究報告顯示

，參松養(yǎng)心膠囊能明顯抑制藥物誘發(fā)的心律失常

，并對缺血再灌注所致心律失常有明顯的保護作用。曾有隨機雙盲臨床試驗顯示

，參松養(yǎng)心膠囊對治療冠心病心律失常有明顯療效

。但未見其對心肌細(xì)胞離子通道影響的報告。鉀離子通道是影響細(xì)胞膜復(fù)極的重要通道

，本研究采用全細(xì)胞膜片鉗記錄技術(shù)

，探討參松養(yǎng)心膠囊對大鼠單個心室肌細(xì)胞鉀離子通道IKI、Ito的影響

，了解其藥理作用的電生理機制

，為其臨床應(yīng)用進(jìn)一步提供理論和實驗依據(jù)。

材料和方法

材料

1.試劑參松養(yǎng)心膠囊提取干粉

，由石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司提供

。Ⅱ型膠原酶(collagenase Ⅱ)為Gibico 公司產(chǎn)品。鏈蛋白酶E為Merck公司產(chǎn)品

。N-2-羥乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸(HEPES)

、乙二醇-雙四乙酸(EGTA)、谷氨酸(L-Glutamic acid)

、?div id="jfovm50" class="index-wrap">；撬?Taurine)

、天門冬氨酸、磷酸肌酸二鈉

、氯化膽堿(Choline-Cl

，ChCl)、氯化鈣（CaCl2）

、K2ATP為Sigma公司產(chǎn)品

。4-氨基吡啶(4-AP)為Fluka公司產(chǎn)品。其余試劑為國產(chǎn)分析純

，由北京化學(xué)試劑公司提供

。

2.溶液 ①無鈣臺氏液(mmol/L)：NaCl136、KCl5.4

、MgCl21.0

、NaH2PO40.33、HEPES10

、Glucose10

，用NaOH調(diào)pH至7.4。②KB液(mmol/L)：KCl40

、KH2PO420

、MgSO43.0、KOH80

、L-谷氨酸50

、牛磺酸20

、HEPES10

、Glucose10、EGTA0.5

，用KOH調(diào)pH至7.4

。③記錄全細(xì)胞鉀電流的灌流液(mmol/L)：Choline-Cl136、MgCl21.2

、KCl5.4

、NaH2PO40.33、CaCl21.8,CdCl20.15,HEPES10

、Glucose10

，用LiOH調(diào)pH至7.4

。記錄IK時加1mmol/L BaCl2以阻斷IKI電流

。④記錄全細(xì)胞鉀電流的電極內(nèi)液(mmol/L)：天門冬氨酸鉀120、KCl20

、HEPES5

、MgCl21.0

、K2ATP4、EGTA10

、磷酸肌酸二鈉2

，用KOH調(diào)pH至7.3。所用電極內(nèi)液均經(jīng)過直徑0.22μm微孔濾膜過濾

。⑤參松養(yǎng)心膠囊藥物溶液的配制：將參松養(yǎng)心膠囊提取干粉

，先用無KCl的細(xì)胞外灌流液配制成質(zhì)量濃度0.5％溶液，再調(diào)整K+濃度至5.4mmol/L,離心取上層溶液備用

。

3.動物雄性SD大鼠

，體重250～300g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供

。

方法

1.單個心肌細(xì)胞的分離

參考文獻(xiàn)并加以改進(jìn)

，用急性酶解法制備心室肌單個細(xì)胞。取大鼠用50mg/kg戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉后

，開胸取出心臟

，在4℃無鈣Tyrode液中去除脂肪和心包膜，分離主動脈并插管

，行Langendorff心臟灌流（圖1）

，速度為6～8ml/min。先以無鈣臺氏液灌流3分鐘（灌注壓為20cm水柱）

，洗凈冠脈內(nèi)血液

，再用低鈣酶解液（CaCl2為0.05mmol/L低鈣臺氏液,含Ⅱ型膠原酶0.4mg/ml，鏈蛋白酶E0.04mg/ml）循環(huán)灌流

，大約20分鐘后

，將心臟從Langendorff裝置上取下，置入室溫KB液中

，剪去心房和基底部的組織

，持眼科鑷將心室組織輕輕撕拉，用粗開口的吸管緩慢吹打

，使心肌細(xì)胞從心肌組織上脫離

，獲得單個心室肌細(xì)胞,上清液用120目的尼龍過濾網(wǎng)過濾，心肌細(xì)胞收藏在含KB液的試管中

。整個灌流系統(tǒng)溫度保持在37℃

，所有的灌流液和KB液均通以100%的O2飽和30分鐘以上。將細(xì)胞在室溫下靜置半小時左右復(fù)鈣至0.25mmol/L

，室溫保存?zhèn)溆?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">。豚鼠心肌?xì)胞的分離方法基本相同。

2.全細(xì)胞膜片鉗實驗記錄

實驗前吸取少許富含細(xì)胞的KB懸液于0.5ml的灌流槽中

，靜置5～10分鐘

，待細(xì)胞沉底附壁后

，用100%O2飽和的細(xì)胞外液實驗前吸取少許富含細(xì)胞的KB懸液于0.5ml的灌流槽中，靜置5～10分鐘

，待細(xì)胞沉底附壁后

，用100%O2飽和的細(xì)胞外液進(jìn)行表面灌流5～10分鐘，流速約2ml/分鐘

。在倒置顯微鏡(OLYMPUS1×70)下選擇邊緣清楚

、表面光滑、橫紋清晰

、無收縮的細(xì)胞

。實驗在22～24℃室溫下進(jìn)行。采用Hamill 等人的標(biāo)準(zhǔn)全細(xì)胞膜片鉗記錄方法

，在電壓鉗制模式下記錄通道電流

。膜片鉗放大器(Axopatch700B，美國Axon公司)

，通過A/D和D/A數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換器（Digidata1322

，美國Axon公司）同計算機相連接。刺激信號及電壓

、電流輸入信號的采集均由軟件(pClampex10.0

，美國Axon公司)控制。玻璃毛胚管(中國科學(xué)院物理所提供)經(jīng)微電極拉制儀(p-97

，美國Sutter公司)進(jìn)行4步拉制而成

，經(jīng)拋光儀(MF-830，日本Narishige公司)拋光后尖端直徑2～3μm

。充灌電極內(nèi)液后入水電阻為1.5～3MΩ

，補償液接電位后，調(diào)節(jié)三維操縱器(MHW-3

，日本NARISHIGE公司)使電極尖端移向細(xì)胞表面

，形成高阻封接(giga seal)，封接電阻為1GΩ以上

。補償快電容并吸破細(xì)胞膜形成全細(xì)胞記錄模式

。電容測定時給予－10mV躍階的刺激，采用Cm=τ·Iss/△V求膜電容

。調(diào)節(jié)慢電容補償和串聯(lián)電阻補償80%～90%以減少瞬時充放電電流和鉗位誤差

。信號經(jīng)截止頻率為1kHz的4階貝塞爾低通濾波器

，采樣率為10kHz

。

在記錄時，為避免電流衰減（run down）現(xiàn)象的影響

，電極內(nèi)液中加入ATP，并控制實驗在細(xì)胞破膜后25分鐘內(nèi)完成

。根據(jù)實驗設(shè)計

，將配制好的藥物溶液

，用恒流蠕動泵以2ml/分鐘速度向細(xì)胞灌流槽分別灌流

，同時使用整負(fù)壓吸引裝置將廢液從灌流槽中吸除。記錄方法為破膜后穩(wěn)定5分鐘記錄給藥前的電流值

，給藥5分鐘后記錄藥物作用下的電流值

。采樣后數(shù)據(jù)存貯在電腦硬盤內(nèi)，供測量及分析用

。為消除細(xì)胞間誤差

，電流值以電流密度(pA/pF)表示。

3.各電流刺激方案設(shè)定及觀察指標(biāo)

記錄IKI時刺激方案維持電位(Vh)-40mV

，指令電位-120mV~0mV,躍階10mV,鉗制時間400ms,刺激頻率0.2Hz

。以測試電壓-100mV的IKI穩(wěn)態(tài)電流密度在用藥前后的變化作為觀察指標(biāo)。

記錄Ito電流電壓關(guān)系時刺激方案

維持電位(Vh)-90mV

，先給予－40mV20ms前刺激

，再給予-40mV~+60mV去極化刺激,躍階10mV,鉗制時間400ms,刺激頻率0.2Hz。以測試電壓60mV Ito峰值電流密度在用藥前后的變化作為觀察指標(biāo)

。

記錄Ito穩(wěn)態(tài)失活的刺激方案維持電壓－90mV,給予400ms從－120mV～60mV躍階10mV的前刺激

，然后鉗制在60mV300ms記錄Ito電流，并比較用藥前后的變化

。

2
、哪些心律失常患者適合服用參松養(yǎng)心膠囊
？

無器質(zhì)性心臟病

，但患者有心慌氣短、乏力

、失眠癥狀伴或不伴早博

，均可單獨用參松養(yǎng)心膠囊，一日3次

、一次2-4粒

。
有器質(zhì)性病變，如冠心病/心肌炎/心肌病/高血壓等合并各類早博

，早博并不重

，可用參松養(yǎng)心膠囊既可以抗心律失常，又可以協(xié)助基礎(chǔ)藥物改善患者冠心病基礎(chǔ)病變。單獨應(yīng)用或聯(lián)合改善基礎(chǔ)病變的西藥應(yīng)用

。一日3次

、一次2-4粒。
西藥治療棘手的心律失常

，如快慢綜合征

，房室傳導(dǎo)阻滯伴早博，可以應(yīng)用參松養(yǎng)心膠囊

。一日3次

、一次2-4粒。
緩慢性心律失常

，包括竇緩

、房室傳導(dǎo)阻滯伴早搏、慢快綜合癥等

，不僅改善患者的癥狀

，而且提高患者的心率。
更年期綜合征

、心臟神經(jīng)官能征

、過度緊張、勞累

、情緒

、壓力及神經(jīng)衰弱等引起引起的心慌、氣短

、乏力

、失眠等癥狀。20

、參松養(yǎng)心膠囊對哪些早搏（室早和房早）效果顯著

治療心律失常的藥物有哪些
？哪些副作用小
？

根據(jù)詞條的解釋

，心律失常（arrhythmia）是由于竇房結(jié)激動異常或激動產(chǎn)生于竇房結(jié)以外

，激動的傳導(dǎo)緩慢

、阻滯或經(jīng)異常通道傳導(dǎo)，即心臟活動的起源和（或）傳導(dǎo)障礙導(dǎo)致心臟搏動的頻率和（或）節(jié)律異常

。事實上

，心律失常的病因主要有三種：第一種是情緒刺激：在日常生活中

，如果壓力過大，導(dǎo)致情緒波動

，也可以引發(fā)心律失常

；第二種是藥物因素：有些藥物如果使用不當(dāng)也可以引起心律失常，許多抗心律失常藥可以引起心律失常

，如D受體阻滯劑

、胺碘酮等，維生素C也可以引起心律失常

。第三種是不良生活習(xí)慣：平時如果生活作息不規(guī)律以及不良的生活習(xí)慣

，日積月累

，也是會引發(fā)心律失常的

。

事實上，從現(xiàn)在的情況來看

，抗心律失常的藥物主要有四大類

，其中Ⅰ類主要是用于阻斷心肌和心臟傳導(dǎo)系統(tǒng)的鈉通道，具有膜穩(wěn)定作用

，減慢傳導(dǎo)速度

；Ⅱ類β受體阻滯藥，主要是為了抑制交感神經(jīng)興奮所致的起搏電流

、降低自律性

，減慢傳導(dǎo)性，藥物主要包括普萘洛爾

、阿替洛爾

、美托洛爾等；Ⅲ類主要作用是延長動作電位時程藥

，抑制多種鉀電流

，藥物有胺碘酮；Ⅳ類鈣通道阻滯藥

，主要包括維拉帕米

、地爾硫卓等。

事實上

，不管是哪類藥

，都是有副作用的，我們不妨分別來介紹一下：

第一

，Ⅰ類的副作用主要是胃腸道反應(yīng)

、低血壓、心動過緩

、傳導(dǎo)阻滯

。

第二

，Ⅱ類的副作用是導(dǎo)致竇性心動過緩，房室傳導(dǎo)阻滯

，并可能誘發(fā)心力衰竭和哮喘

、低血壓等。長期應(yīng)用對脂質(zhì)代謝和糖代謝有不良影響

，故高脂血癥

、糖尿病患者應(yīng)慎用。突然停藥可產(chǎn)生反跳現(xiàn)象

。

第三

，Ⅲ類的副作用主要是口干、惡心

、腹脹

、腹瀉、頭痛

、頭暈等

。靜注過快可出現(xiàn)血壓下降、心動過緩

，嚴(yán)重者可致心臟停搏

。

第四，IV類的不良反應(yīng)一般與劑量有關(guān)

，比較常見的副作用有竇性心動過緩

、房窒傳導(dǎo)阻滯及Q-T間期延長，少數(shù)患者發(fā)生甲狀腺功能亢進(jìn)或減退及肝壞死

，個別患者出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎或肺纖維化

。

事實上，不管是哪類抗心律失常的藥物

，基本上都是有副作用的

，畢竟“是藥三分毒”，由于心律失常的發(fā)生機制比較復(fù)雜

，各種抗心律失常藥物的作用及副作用也多不相同

。從這里來看，當(dāng)我們在選擇藥物時

，一定要做好全面的考慮

，同時也應(yīng)該講究用藥的劑量及方法，才能取得預(yù)期應(yīng)有的效果

。

參松養(yǎng)心膠囊取得過什么榮譽嗎？

2010年1月11日

，國家科學(xué)技術(shù)獎勵大會在人民大會堂隆重舉行

，由吳以嶺院士主持

，以嶺醫(yī)藥集團、北京阜外醫(yī)院等承擔(dān)的國家科技部創(chuàng)新基金資助項目“參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常應(yīng)用研究”獲得2009年度國家科技進(jìn)步二等獎

，系2009年度全國醫(yī)藥類科技成果最高榮譽

，這也是以嶺醫(yī)藥集團自2000年以來第四次獲得國家大獎。

參松養(yǎng)心膠囊之所以能獲得國家科技進(jìn)步二等獎

，是由于它在國內(nèi)首先開展了中藥抗心律失常的循證醫(yī)學(xué)研究

。循證醫(yī)學(xué)是近年來在世界范圍內(nèi)興起的最權(quán)威、客觀的藥物療效評價方法

，它的研究特點是：大范圍

、多樣本、隨機雙盲

。通過循證醫(yī)學(xué)研究就能得出國際公認(rèn)的藥物療效

，選出真正值得醫(yī)生和患者信賴的藥物。我國中藥開展循證醫(yī)學(xué)研究的極少

，應(yīng)該說這項研究剛剛起步

。參松養(yǎng)心膠囊抗心律失常循證醫(yī)學(xué)研究在全國各地36家大型綜合性三甲醫(yī)院中展開

，其中包括北京阜外心血管病醫(yī)院

、首都醫(yī)科大學(xué)朝陽醫(yī)院、南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院

、山東大學(xué)齊魯醫(yī)院等

，參與的醫(yī)學(xué)專家達(dá)500多名。研究結(jié)果表明

，參松養(yǎng)心膠囊治療非器質(zhì)性室性早搏顯著優(yōu)于對照組

，治療器質(zhì)性室性早搏顯著優(yōu)于西藥慢心律；治療陣發(fā)性房顫療效與西藥心律平相當(dāng)

，并且對目前尚無有效藥物治療的緩慢性心律失常如竇緩

、病竇、傳導(dǎo)阻滯

、慢快綜合征等也具有較好療效

，填補了緩慢性心律失常藥物治療的空白。這標(biāo)志著中藥在某些治療領(lǐng)域堪比西藥甚至超過西藥

，并且長期用藥安全

。目前西藥治療心律失常存在的最大問題就是它的毒副作用，而且許多藥物治療有效劑量與引發(fā)毒副反應(yīng)劑量非常相近

，用不夠劑量控制不住心律失常

，用足劑量有可能引發(fā)更嚴(yán)重的心律失常，甚至增加心血管病的死亡率

。

參松養(yǎng)心膠囊的研究成功為眾多心律失?div id="m50uktp" class="box-center"> ；颊咛峁┝税踩行幬?div id="m50uktp" class="box-center"> ，為我國中成藥臨床研究起到了積極的示范作用，并向國內(nèi)外醫(yī)學(xué)界表明

，中藥接受主流醫(yī)學(xué)科研方法評價

，可以取得令人信服的療效，這對中藥現(xiàn)代化

、國際化具有重大意義

。

參松養(yǎng)心膠囊是以中醫(yī)絡(luò)病理論為指導(dǎo)開發(fā)的治療心律失常的有效藥物，具有整合調(diào)節(jié)抗心律失常的特點

，參松養(yǎng)心膠囊可以對鈉

、鈣、鉀等多種心臟離子通道起到明顯的調(diào)節(jié)作用

，可以改善心肌細(xì)胞代謝紊亂

，調(diào)整心臟起搏傳導(dǎo)系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)心臟自主神經(jīng)功能

，改善心肌供血

。參松養(yǎng)心膠囊同時具備多離子通道阻滯與非離子通道調(diào)節(jié)的優(yōu)勢成為其臨床快慢兼治心律失常的電生理基礎(chǔ)。

參松養(yǎng)心膠囊是科技部創(chuàng)新基金資助項目

、國家高技術(shù)產(chǎn)品

、國家重點新產(chǎn)品。每年服用參松養(yǎng)心膠囊治療心律失常的患者達(dá)300萬人以上