法國(guó)醫(yī)藥和衛(wèi)生安全管理局日前叫停了一項(xiàng)艾滋病疫苗藥物的臨床試驗(yàn)
據(jù)法國(guó)《費(fèi)加羅報(bào)》報(bào)道
抗艾藥物試驗(yàn).png)
暫停試驗(yàn)的艾滋病疫苗藥物由綜合型氨基酸（構(gòu)成艾滋病病毒的蛋白碎片）和脂類物質(zhì)合成
1 概述
測(cè)定細(xì)菌在體外抗菌藥物敏感性（以下稱藥敏試驗(yàn)）的試驗(yàn)方法很多。
絕大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室以瓊脂擴(kuò)散法作為常規(guī)方法測(cè)定常見的快速生長(zhǎng)的病原菌
本文介紹的是標(biāo)準(zhǔn)紙片擴(kuò)散法
本文提出的一系列建議有助于藥敏試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化。
具體地?cái)⑹隽爽F(xiàn)行推薦方法的操作步驟
本文還重溫了國(guó)際協(xié)作研究會(huì)（ICS）的有關(guān)建議和食品藥物管理局（FDA）的有關(guān)規(guī)定，并采納了其中的有關(guān)章節(jié)
只根據(jù)是否出現(xiàn)抑菌環(huán)而不考慮其大小來(lái)判斷細(xì)菌對(duì)抗菌藥物敏感性的試驗(yàn)方法
紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)必須遵循標(biāo)準(zhǔn)的方法學(xué)原理
要得到可靠結(jié)果
美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）下設(shè)的紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)分委員會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法
，以Bauer等介紹的方法為基礎(chǔ)，是目前敘述最完整的試驗(yàn)方法。其中的解釋標(biāo)準(zhǔn)是綜合臨床和實(shí)驗(yàn)室的數(shù)據(jù)發(fā)展而來(lái)，并得到證實(shí)
本文介紹的是現(xiàn)行紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)的操作
當(dāng)發(fā)現(xiàn)新問(wèn)題并有所改進(jìn)時(shí)
紙片法抗菌藥物敏感實(shí)驗(yàn)操作標(biāo)準(zhǔn)
2 做藥敏試驗(yàn)的指證
任何細(xì)菌引起的感染均需要治療
如果依細(xì)菌的種類不能預(yù)知其敏感性
通常
當(dāng)致病菌屬于一種對(duì)一般常用抗菌藥物耐藥的細(xì)菌，最需要做藥敏試驗(yàn)
細(xì)菌耐藥機(jī)制包括：產(chǎn)生滅活藥物的酶
有些細(xì)菌的抗菌藥物敏感性可以預(yù)知
當(dāng)感染由一種對(duì)某高效抗菌藥物敏感的細(xì)菌引起時(shí)，就不必做藥敏試驗(yàn)（如
但對(duì)青霉素過(guò)敏的病人，分離出的化膿性鏈球菌也許要測(cè)一下紅霉素和四環(huán)素的敏感性
細(xì)菌耐藥性流行病學(xué)研究及新抗菌藥物的研究也需要做藥敏試驗(yàn)。
做藥敏試驗(yàn)
不同菌種不可在同一平板上做混合細(xì)菌藥敏試驗(yàn)
一般避免用臨床標(biāo)本（如無(wú)菌體液和尿液）直接做藥敏
對(duì)感染性質(zhì)不同
，標(biāo)本中混有渾濁細(xì)菌或正常菌群的情況，其中的細(xì)菌也許與感染治療關(guān)系不大，常不必做藥敏，不然反會(huì)招致錯(cuò)誤的引導(dǎo)。3 常規(guī)測(cè)定藥物的選擇
要測(cè)定和報(bào)告給哪些藥物，須與感染科醫(yī)生
、醫(yī)院的藥品委員會(huì)及感染控制委員會(huì)協(xié)商，然后由實(shí)驗(yàn)室制定最合適的方案。表1和表1A列出了治療各類細(xì)菌感染有效的藥物
，其體外藥敏試驗(yàn)結(jié)果也有助于感染的控制及流行病學(xué)研究。3.1 常規(guī)報(bào)告
表1和表1A列出的抗菌藥物是我們目前認(rèn)為比較適合的。
選藥時(shí)做了多方面考慮
，包括微生物學(xué)、臨床藥理學(xué)因素及美國(guó)FDA認(rèn)可的臨床適用性和療效。為了避免誤導(dǎo)
，給臨床醫(yī)生的報(bào)告應(yīng)只包括治療上有用的藥物，如表1和表1A。根據(jù)情況需要
，可在此基礎(chǔ)上增減。為了積累分類學(xué)和流行病學(xué)資料也可選擇用于治療以外的藥物，但結(jié)果僅限于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的感染控制醫(yī)生或醫(yī)院感染流行學(xué)專家用
，不可報(bào)給臨床醫(yī)生。3.2 使用認(rèn)可的名稱
所有抗菌藥物均采用官方認(rèn)可的名稱以避免混淆。
為了強(qiáng)調(diào)大多數(shù)現(xiàn)用抗生素之間的關(guān)系
，按藥物的種類分組如下：3.2.1 β－內(nèi)酰胺類 所有β－內(nèi)酰胺類藥物都具有相同的中央β－內(nèi)酰胺環(huán)結(jié)構(gòu)
，并以抑制細(xì)胞壁合成為主要作用機(jī)理。β－內(nèi)酰胺環(huán)上的取代環(huán)結(jié)構(gòu)或取代基決定了藥物屬于青霉素類
3.2.1.1 青霉素類 青霉素主要針對(duì)不產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的革蘭氏陽(yáng)性菌和某些嬌嫩革蘭氏陰性菌。
酰胺類青霉素（氨芐西林和阿莫西林）和酰脲基青霉素（美洛西林和哌拉西林）對(duì)革蘭氏陰性菌的抗菌范圍更大
耐青霉素酶的青霉素（氯唑西林、雙氯西林
3.2.1.2 β－內(nèi)酰胺類/β－內(nèi)酰胺酶抑制合劑類 這類藥物由一種青霉素和一種抗菌活性小但可抑制某些β－內(nèi)酰胺酶作用的物質(zhì)組成合劑
。目前使用的抑制劑有三種：棒酸
、舒巴坦和他唑巴坦。合劑的抗菌效果不可僅靠合劑中青霉素藥敏試驗(yàn)的結(jié)果預(yù)測(cè)
。3.2.1.3 頭孢烯類（包括頭孢菌素類）
3.2.1.4 碳青霉烯類 碳青霉烯類藥物在結(jié)構(gòu)上與青霉素稍有不同
，對(duì)β－內(nèi)酰胺酶有更強(qiáng)抗水解力，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的抗菌譜更廣。3.2.1.5 單環(huán)類 單環(huán)類結(jié)構(gòu)獨(dú)特
，僅對(duì)須氧革蘭氏陰性菌有作用。目前，氨曲南是美國(guó)FDA唯一通過(guò)的單環(huán)類藥物
。3.2.2 粘肽類 粘肽類化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜
，主要抑制細(xì)胞壁合成，但作用位點(diǎn)不同于β－內(nèi)酰胺類。這類藥物主要針對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌
。萬(wàn)古霉素主要用于治療對(duì)青霉素過(guò)敏病人的革蘭氏陽(yáng)性菌感染。
還用于治療β－內(nèi)酰胺類藥物耐藥的革蘭氏陽(yáng)性菌
，如MSRA和某些腸球菌。3.2.3 氨基糖苷類 這類藥物結(jié)構(gòu)類似，在核糖體水平抑制蛋白質(zhì)合成
。由于對(duì)氨基糖苷滅活酶的耐受性的差異
，不同藥物的抗菌譜也有所不同。此類藥物主要治療須氧革蘭氏陽(yáng)性菌感染
，或主要作用于細(xì)胞壁的抗生素聯(lián)合治療某些耐藥革蘭氏陽(yáng)性菌，如腸球菌。3.2.4 大環(huán)內(nèi)脂類 此類藥物結(jié)構(gòu)相似
，在核糖體水平抑制蛋白質(zhì)的合成。此類中僅有幾種現(xiàn)仍用于測(cè)試革蘭氏陽(yáng)性菌或柔嫩革蘭氏陽(yáng)性菌。
3.2.5 四環(huán)素類 此類藥物在核糖體水平抑制某些革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌的蛋白質(zhì)合成
。此類藥物極為相似
，少有例外，常規(guī)測(cè)四環(huán)素即可。3.2.6 喹諾酮類 此類藥物結(jié)構(gòu)相似
，主要是抑制許多革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌的DNA螺旋酶活性。各藥的抗菌譜不完全一致
3.2.7 磺胺類和甲氧芐氨嘧啶（TMP） 此類藥物包括幾種化療制劑，抗菌譜相同
磺胺甲基異惡唑最常用，主要用于治療尿路感染
藥敏試驗(yàn)可選此藥
磺胺甲基異惡唑常與TMP合用，它們分別在革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌葉酸代謝的兩個(gè)步驟中起抑制作用
3.2.8 其他藥物 氯霉素
、克拉霉素和利福平均是抑制蛋白質(zhì)合成，但彼此在結(jié)構(gòu)上沒(méi)有關(guān)系，均需作體外測(cè)試。呋喃妥因在核糖體水平抑制蛋白質(zhì)合成
，此藥在體液中濃度極低，通常只用于泌尿系感染。3.3 選藥指南
為使常規(guī)藥敏試驗(yàn)合理
，應(yīng)限制測(cè)定藥物的數(shù)量。表1和表1A足以滿足大多數(shù)臨床實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的需要
。該表按特定菌或菌群分若干組
，將各種抗生素?fù)駜?yōu)次序排列，供常規(guī)實(shí)驗(yàn)室選擇。表中每格列的一組相似抗生素
，療效相似，不必重復(fù)選擇。以“或”相連的藥物
，抗菌譜類似，表現(xiàn)為交叉耐藥。因此
，每格（一類或相關(guān)組）中的藥物只需選擇一種。一般
，每種藥物的藥敏結(jié)果必須經(jīng)過(guò)測(cè)定后才能報(bào)告，個(gè)別情況可以根據(jù)另外的藥物的結(jié)果推測(cè)（如葡萄球菌對(duì)頭孢類的結(jié)果可根據(jù)苯唑西林的結(jié)果推測(cè)）。選擇的藥物應(yīng)與醫(yī)院常用藥物吻合
。3.4 常規(guī)報(bào)告和選擇性報(bào)告的原則
如表1和表1A所列
B組包括了臨床上重要的藥物，特別是對(duì)院內(nèi)感染
但是
其他情況還有：特定的標(biāo)本（如CSF中分離的腸桿菌應(yīng)測(cè)三代頭孢菌素，或泌尿系菌株測(cè)TMP/SMZ）
C組包括替代或后備藥物
D組包括僅限于泌尿系感染使用的藥物（如呋喃妥因和有機(jī)酸類）
每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)決定哪些藥物（表1和表1A）作為常規(guī)（A組）報(bào)告
選擇性報(bào)告須有助于對(duì)該報(bào)告的理解
雖然B組藥物的試驗(yàn)結(jié)果不作為常規(guī)報(bào)告
，但是，一旦臨床需要應(yīng)該及時(shí)提供，或者對(duì)特定的標(biāo)本作為常規(guī)報(bào)告。異常耐藥應(yīng)該報(bào)告
4.0 試劑
4.1 Mueller-Hinton瓊脂
在現(xiàn)有的許多培養(yǎng)基中
盡管Mueller-Hinton瓊脂通常是可靠的，但是偶然產(chǎn)品也有批間差
如果一批培養(yǎng)基不能很好地保證細(xì)菌生長(zhǎng)
只有按NCCLS M6-P做過(guò)試驗(yàn)并符合規(guī)定的培養(yǎng)基才能使用。
4.1.1 制備Mueller-Hinton瓊脂
制備Mueller-Hinton瓊脂的步驟如下：（1）按產(chǎn)品說(shuō)明用干粉培養(yǎng)基制備
內(nèi)徑14cm的平皿需要培養(yǎng)基約60－70ml，內(nèi)徑9cm平皿約需25－30ml
玻璃或塑料平皿均可使用
如用塑料袋包裹
過(guò)期培養(yǎng)基須以質(zhì)控菌株按4.3節(jié)介紹的方法測(cè)定
抽樣的平板不可再用。
4.1.2 pH值
每批Mueller-Hinton瓊脂
檢查方法依實(shí)驗(yàn)室所具備的設(shè)備條件。
培養(yǎng)基的pH值室溫下應(yīng)為7.2-7.4
如果pH值偏低，某些藥的活性會(huì)下降（如氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)脂類）
pH值測(cè)定方法有：（1）將pH電極浸入融化的瓊脂培養(yǎng)基中
4.1.3 水份
使用前，瓊脂平板表面如有水份
瓊脂表面應(yīng)潮濕
培養(yǎng)時(shí)
4.1.4 胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶的作用
如培養(yǎng)基含有過(guò)量的胸腺嘧啶核苷和胸腺嘧啶，磺胺藥和甲氧芐氨嘧啶的活力被抵消
購(gòu)買培養(yǎng)基時(shí)
可以用標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)控菌株糞腸球菌ATCC29212或33186測(cè)試復(fù)方磺胺的紙片
培養(yǎng)基上出現(xiàn)直徑大于20mm的抑菌環(huán)為合格。
不合格的培養(yǎng)基上不出現(xiàn)抑菌環(huán)
、環(huán)內(nèi)有細(xì)菌生長(zhǎng)或抑菌環(huán)小于20mm。4.1.5 二價(jià)離子的影響
二價(jià)離子，主要是鎂和鈣離子
，影響四環(huán)素、多粘菌素、氨基糖苷類藥物對(duì)綠膿假單胞菌的測(cè)定結(jié)果。陽(yáng)離子過(guò)量抑菌環(huán)變小
，濃度過(guò)低抑菌環(huán)增大。鋅離子可影響羧基青霉素的結(jié)果
。每批培養(yǎng)基都應(yīng)測(cè)試
應(yīng)細(xì)致觀察質(zhì)控菌株的測(cè)定結(jié)果
4.1.6 被測(cè)菌株生長(zhǎng)不好的解決辦法
只有能夠在未強(qiáng)化的Mueller-Hinton瓊脂培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的須氧菌或兼性厭氧菌才能在此培養(yǎng)基上做藥敏試驗(yàn)。
某些嬌嫩細(xì)菌
這類細(xì)菌
（另見表4）
4.2 藥敏紙片的保存
藥敏紙片應(yīng)注意保存在干燥環(huán)境
按下法保存：（1）在8℃以下保存
β－內(nèi)酰胺類藥的紙片應(yīng)密封冷凍保存，僅取少量作為日常使用
有些不穩(wěn)定的抗生素（如頭孢拉定、棒酸合劑）須冷凍保存
4.3 標(biāo)準(zhǔn)比濁管
用硫酸鋇比濁管（0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)），標(biāo)定接種菌液濃度
。比濁管制備方法如下：（1）0.048mol/L BaCl2
，（1.175% w/v BaCl2·2H2O）0.5ml，加到99.5ml的0.18 mol/L（0.36N）H2SO4（1％v/v）溶液中，制成比濁管；（2）用光徑為1cm的分光光度計(jì)測(cè)定光吸收來(lái)標(biāo)定比濁管。0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管在625nm波長(zhǎng)的吸收光度應(yīng)為0.08-0.1
；（3）選管徑與制備菌液試管相同的螺口試管，每管分裝4－6ml；（4）將試管帽擰緊，放室溫暗處保存；（5）用前，將比濁管在旋轉(zhuǎn)振蕩器上混勻。如出現(xiàn)大顆粒
，應(yīng)更換；（6）每個(gè)月更換比濁管或復(fù)檢比濁管的濁度。5 操作步驟
5.1 制備接種菌液
5.1.1 增菌法 步驟如下：（1）選瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落至少4－5個(gè)
，用接種環(huán)挑其頂部，移至4－5ml肉湯或大豆酪蛋白消化液中；（2）置35℃培養(yǎng)至菌液濃度達(dá)到或超過(guò)比濁管濃度（一般需2－6小時(shí)），濃度約1－2×108CFU/ml；（3）用生理鹽水或肉湯校正菌液濃度，與比濁管相同。可用光電比濁。
目測(cè)比濁須在適當(dāng)光照下以黑色線條為反襯
。5.1.2 直接菌懸液法 步驟如下：（1）做常規(guī)藥敏試驗(yàn)
，可直接用過(guò)夜培養(yǎng)的菌落（必須用無(wú)選擇性培養(yǎng)基平板，如普通瓊脂培養(yǎng)基）在鹽水或肉湯中制備接種菌液。菌液濃度調(diào)至0.5麥?zhǔn)瞎埽?2)此法適用于在肉湯培養(yǎng)基中生長(zhǎng)不好的細(xì)菌如嗜血桿菌
5.2 接種平板 步驟如下：（1）校正的菌液須在15分鐘內(nèi)使用
。用一無(wú)菌棉試子蘸取菌液并在上端管壁旋轉(zhuǎn)擠壓幾次
，去掉過(guò)多的菌液；（2）用試子涂布整個(gè)瓊脂平板表面，反復(fù)涂布幾次，每次將平皿旋轉(zhuǎn)60度，保證涂布均勻。（3）將平皿蓋打開3－5分鐘
，使培養(yǎng)基表面的水份吸收掉。然后貼藥敏紙片
；（4）注意：避免用過(guò)濃的菌液，禁用未經(jīng)稀釋菌或其他不標(biāo)準(zhǔn)菌液接種平板。5.3 貼紙片 （1）接種平板后
，貼上藥敏紙片。用鑷子或針尖壓一下紙片使其與培養(yǎng)基表面貼牢。
紙片要貼得均勻
，紙片與紙片中心距離不得小于24mm。原則上，直徑150mm得平板貼12張紙片
，直徑100mm平板貼5張紙片。紙片貼后不應(yīng)再移動(dòng)，因?yàn)橛行┧幬飼?huì)立即擴(kuò)散
；（2）貼上紙片15分鐘內(nèi)，須把平板倒放在35℃恒溫箱中。因?yàn)橐志h(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn)是在普通環(huán)境中標(biāo)定的
，所以除嗜血桿菌和淋病奈瑟氏菌外，平板不可放在高CO2的環(huán)境中。CO2與某些因素作用可使抑菌環(huán)增大
。5.4 讀取結(jié)果 （1）經(jīng)16－18小時(shí)培養(yǎng)后
，觀察結(jié)果。菌液濃度適合且涂得好
，抑菌環(huán)規(guī)則，細(xì)菌呈融合生長(zhǎng)。如果出現(xiàn)單個(gè)菌落，說(shuō)明接種量小
培養(yǎng)基中如果加了血液
如果是葡萄球菌或腸球菌，須培養(yǎng)24小時(shí)后
抑菌環(huán)內(nèi)有任何生長(zhǎng)的表現(xiàn)都表明是耐藥菌株。
（2）肉眼見不到細(xì)菌明顯生長(zhǎng)的區(qū)域?yàn)橐志h(huán)邊緣
如抑菌環(huán)內(nèi)有大量細(xì)菌生長(zhǎng)，須再移植出來(lái)
，重新鑒定，重新做藥敏試驗(yàn)。變形菌在某些抗菌藥物紙片周圍可彌漫生長(zhǎng)到抑菌的區(qū)域內(nèi)
，當(dāng)抑菌環(huán)邊緣清楚，彌漫生長(zhǎng)不算。甲氧芐氨嘧啶和磺胺藥的拮抗劑會(huì)支持細(xì)菌生長(zhǎng)
，因而測(cè)這類藥時(shí)可忽略輕微生長(zhǎng)（80％以上受抑制），以濃密生長(zhǎng)的區(qū)域作為抑菌環(huán)的界限。用加血的培養(yǎng)基測(cè)鏈球菌
，測(cè)量抑菌環(huán)時(shí)不包括溶血環(huán)。（3）參照表2的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)抑菌環(huán)的大小作出解釋，以敏感
、中介或耐藥的形式解釋結(jié)果。6 嬌嫩細(xì)菌
Mueller-Hinton培養(yǎng)基只適用于快速生長(zhǎng)的細(xì)菌，一般不適于測(cè)定嬌嫩細(xì)菌
。嬌嫩細(xì)菌的藥敏試驗(yàn)如果要用紙片法做
以下介紹的紙片方法用于流感嗜血桿菌
其他細(xì)菌須用稀釋法測(cè)定
厭氧菌不能用紙片擴(kuò)散法測(cè)定抗菌藥物敏感性。
6.1 嗜血桿菌
6.1.1 培養(yǎng)基 紙片擴(kuò)散法試驗(yàn)適用的培養(yǎng)基稱為：嗜血桿菌試驗(yàn)培養(yǎng)基（HTM）
此貯存液30ml加入到1000mlM-H瓊脂中
高壓滅菌
不能用巧克力M-H瓊脂做嗜血桿菌的藥敏試驗(yàn)
6.1.2 操作步驟 用過(guò)夜培養(yǎng)的巧克力平板上的菌落制備接種菌液，操作如下：（1）直接用過(guò)夜培養(yǎng)的巧克力平板上的菌落在M-H肉湯或生理鹽水中調(diào)制菌懸液
合格的菌液濃度為：1－4×108CFU/ml。
制備菌液應(yīng)特別注意
菌液須在15分鐘內(nèi)使用
（2）其他步驟按5.2操作
（3）平板放5－7％CO2環(huán)境
6.1.3 抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn) 嗜血桿菌應(yīng)測(cè)的藥物濃度見表1A
除此之外無(wú)需測(cè)定其他藥物。
6.2 淋病奈瑟氏菌
6.2.1 培養(yǎng)基 測(cè)定淋病奈瑟氏菌的標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基是加有1％添加劑的GC瓊脂，不必補(bǔ)充其他添加劑
6.2.2 操作步驟 （1）直接用過(guò)夜培養(yǎng)的巧克力平板上的菌液在M-H肉湯或生理鹽水中調(diào)至菌懸液，用光度儀與0.5麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，校正濃度?/p>
菌液須在15分鐘內(nèi)使用
（2）其他步驟按5.2操作，不同之處在于：直徑150mm平板至多貼9張紙片
（3）平板放5－7％CO2環(huán)境35℃孵育20－24小時(shí)后，測(cè)量抑菌環(huán)直徑
6.2.3 抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn) 淋病奈瑟氏菌應(yīng)測(cè)的藥物見表1A
除此之外無(wú)需測(cè)其他藥物
注：在10U青霉素紙片周圍產(chǎn)生的抑菌環(huán)≤19mm的菌株
確認(rèn)這種由質(zhì)粒決定的耐藥性菌株
質(zhì)粒決定的對(duì)四環(huán)素耐藥的菌株，抑菌環(huán)直徑≤19mm（30μg四環(huán)素紙片）
此外
6.3 肺炎鏈球菌和其他鏈球菌
6.3.1 培養(yǎng)基 用加5％脫纖維羊血的M-H瓊脂做肺炎鏈球菌和其他鏈球菌的藥敏試驗(yàn)
6.3.2 操作步驟 （1）直接用過(guò)夜培養(yǎng)的血平板上的菌落在M-H肉湯或生理鹽水中調(diào)制菌懸液，用光度儀與0.5麥?zhǔn)媳葷峁鼙葷?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，校正濃度?/p>
菌液須在15分鐘內(nèi)使用
（2）其他步驟按5.2操作，不同處在于：直徑150mm平板至多貼9張紙片
（3）平板放5％CO2環(huán)境35℃孵育20－24小時(shí)后，測(cè)量抑菌環(huán)直徑
6.3.3 抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn) 肺炎鏈球菌和其他鏈球菌應(yīng)測(cè)的藥物見表1A
注：對(duì)青霉素敏感的菌株
耐藥和相對(duì)耐藥的菌株抑菌環(huán)直徑≤19mm，不能報(bào)告對(duì)青霉素耐藥或中度耐藥
苯唑西林藥敏結(jié)果只能推測(cè)肺炎鏈球菌對(duì)青霉素的藥敏，不能推測(cè)其他鏈球菌對(duì)青霉素的藥敏。
從無(wú)菌部位（如腦脊液
草綠色鏈球菌的青霉素藥敏試驗(yàn)不能用紙片法
6.4 甲氧苯青霉素耐藥的葡萄球菌 仍有不少實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)MRS時(shí)會(huì)遇到問(wèn)題
因此
（2）直接用菌懸液法（5.1.2）接種
（3）檢測(cè)MRS必須在35℃孵育滿24小時(shí)（而不是16－18小時(shí)）
（4）借透射光仔細(xì)檢查苯唑西林紙片周圍抑菌環(huán)內(nèi)有無(wú)細(xì)小菌落或輕微彌漫生長(zhǎng)。
（5）MRS通常對(duì)多種抗生素耐藥
了解是否多重耐藥有助于推測(cè)對(duì)甲氧西林耐藥性
（6）如果紙片法結(jié)果有疑問(wèn)
（7）甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌（MRSA）和甲氧西林耐藥凝固酶陰性葡萄球菌對(duì)所有頭孢菌素類和β－內(nèi)酰胺類如阿莫西林/棒酸
因?yàn)?div id="jpandex" class="focus-wrap mb20 cf">，至今的文獻(xiàn)報(bào)道
6.5 耐藥腸球菌
6.5.1 青霉素/氨芐西林藥敏試驗(yàn) 腸球菌對(duì)青霉素和氨芐西林耐藥系因?yàn)楫a(chǎn)生低親和力的青霉素結(jié)合蛋白（PBPs）
，個(gè)別菌株是由于產(chǎn)生β－內(nèi)酰胺酶。紙片法藥敏試驗(yàn)可準(zhǔn)確測(cè)定PBPs改變的菌株
，但對(duì)產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的菌株結(jié)果不可靠。此類菌株應(yīng)測(cè)β－內(nèi)酰胺酶。
6.5.2 萬(wàn)古霉素藥敏試驗(yàn) 腸球菌的紙片法萬(wàn)古霉素藥敏試驗(yàn)
，平板必須孵育24小時(shí)（而不是16－18小時(shí)），借投射光仔細(xì)檢查抑菌環(huán)內(nèi)有無(wú)小菌落或彌漫生長(zhǎng)。紙片法結(jié)果為中介度時(shí)應(yīng)測(cè)MIC.
6.5.3 氨基糖苷類高水平耐藥試驗(yàn) 對(duì)氨基糖苷類藥物高水平耐藥
，可提示不能用青霉素或粘肽類與氨基糖苷類聯(lián)合用藥治療腸球菌的感染。用高濃度慶大霉素（120μg）和鏈霉素（300μg）紙片篩選這類耐藥菌株。
無(wú)抑菌環(huán)為耐藥，抑菌環(huán)≥10mm為非高水平耐藥
。抑菌環(huán)在7－9mm之間再用稀釋法篩選試驗(yàn)測(cè)定
。特殊高濃度紙片的質(zhì)控見表3。
不必測(cè)其他氨基糖苷類藥物
，因?yàn)闆](méi)有比慶大霉素或鏈霉素更強(qiáng)的同類藥6.6 測(cè)定產(chǎn)超廣譜β－內(nèi)酰胺酶的革蘭氏陽(yáng)性桿菌 超廣譜β－內(nèi)酰胺酶（ESBLs）是新認(rèn)識(shí)的一類由質(zhì)粒介導(dǎo)的β－內(nèi)酰胺酶，如TEM-1
ESBLS導(dǎo)致肺炎克雷白氏菌
某些ESBLs導(dǎo)致高水平耐藥，須用紙片法檢測(cè)
另有低水平耐藥株或只能用某個(gè)β－內(nèi)酰胺類藥才能測(cè)出來(lái)
這類菌株的MIC達(dá)不到NCCLS規(guī)定的耐藥分界點(diǎn)，但臨床治療無(wú)效
克雷白氏菌和大腸埃希氏菌的臨床分離株如果對(duì)博拿霉素
細(xì)菌產(chǎn)生ESBL時(shí)
，加入棒酸，抑菌環(huán)增大。ESBL測(cè)定的可靠方法尚在研究中
。目前可參考表1和表4
。7 β－內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)
7.1 目的 對(duì)嗜血桿菌、淋病奈瑟氏菌和卡他莫拉氏菌
，快速β－內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)比紙片法藥敏試驗(yàn)的結(jié)果快。對(duì)產(chǎn)β－內(nèi)酰胺酶的腸球菌，這是唯一可靠方法
。β－內(nèi)酰胺酶試驗(yàn)陽(yáng)性可推測(cè)：（1）淋病奈瑟氏菌
、嗜血桿菌、卡他布蘭漢氏菌對(duì)青霉素、氨芐青霉素和羥氨芐青霉素的耐藥；（2）葡萄球菌對(duì)青霉素及氨基、羧基和酰尿基青霉素類藥物的耐藥性。本文地址:http://m.mcys1996.com/zhongyizatan/78255.html.
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